mobio强力水样DNA提取试剂盒14900-100-NF

mobio强力水样DNA提取试剂盒14900-100-NF

价格: 询价

品牌:Mobio

货号:14900-100-NF

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产品详情

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库存 :9999

英文名 :DNeasy PowerWater Kit (100)

保质期 :一年以上

供应商 :北京智杰方远

保存条件 :RT

规格 :询价

强力水样DNA 提取试剂盒
(提取已过滤水样滤膜微生物基因组 DNA)
 
货号 提取次数 滤膜
14900-50-NF 50 不含
14900-100-NF 100 不含
 

简介

PowerWater® DNA Isolation Kit 可提取各种过滤好的水样基因组 DNA。利用我们的专利抑制因子去除技术
®(IRT),就算水样中含大量污染物,也能顺利地提取出高质量高得率的 DNA。该试剂盒可兼容市面上所有类型的水样滤膜。与我们的 UltraClean® Water DNA Isolation Kit 不用在于:研磨珠套管改用了创新优化的研磨珠混合、修改的裂解缓冲液配方、IRT 技术和减少样品体积使得可以在一个小型离心管中完成所有操作。最终 DNA 体积为 100μl,可直接用于下游实验。
 

操作预览

PowerWater® DNA Isolation Kit 从过滤好的水样滤膜开始。已预先装入滤膜的灭菌 100ml 一次性过滤漏斗可单独从 MOBIO 订购,或自备。把滤膜放入到特殊的含有混搭研磨珠的 5ml 珠磨研磨管中,加入裂解缓冲液,在涡旋仪的驱动下对滤膜微生物进行快速充分裂解。去除蛋白和抑制因子后,总 DNA 选择性吸附到 MOBIO 的硅胶离心柱上。高质量的 DNA 洗脱下来可直接用于 PCRqPCR 等下游实验。

操作步骤
PW1 溶液使用前 55℃预热 5-10min。趁热使用。使用前检查 PW3,若有沉淀则 55℃水浴 5-10min,可趁热使用。


1、使用离心机和一次性或可重复利用漏斗过滤水样。含 0.22μm 0.45μm 滤膜的一次性滤过漏斗可从 MO BIO
单独订购。过滤水样的体积视水样微生物丰度和浑浊程度而定。水样类型参照附文疑难点)。这一步发生了什么:过滤水样,微生物截留到滤膜表面及滤孔中。
2、取下过滤装置漏斗部分。

3、使用两只灭菌镊子从边缘夹起滤膜,滤膜上面朝内卷成圆筒状。

注意:不要卷太紧或折叠滤膜。“卷滤膜方法”可在以下网址观看展示视频。

4、把滤膜放入到 5ml PowerWater® Bead Tube 中。

这一步发生了什么:稍卷滤膜放入PowerWater® Bead Tube 中装备珠磨研磨。

5、往 PowerWater® Bead Tube 加入 1 ml PW1 溶液。

注意:PW1  溶液使用前必须先预热溶解沉淀并趁热使用。若样品中含有难裂解微生物(真菌、海藻,可加入额外水浴步骤。详见附文疑难点。
这一步发生了什么:PW1 为含有去垢剂的强力裂解试剂,可破坏细胞壁,去除非 DNA 的有机、无机成分。同时也是 IRT 技术的组成之一。低温时会形成白色沉淀。55℃水浴不会影响其成分活性。需要趁热使用。
6、把 PowerWater® Bead Tube 安装在 MO BIO 涡旋仪适配器,货号:13000-V1-15 13000-V1-5

7、最大转速涡旋振荡 5min

这一步发生了什么:涡旋振荡的机械作用力在打碎滤膜表面沉积物释放出截留细胞的同时辅助裂解细胞。使用涡旋仪适配器可提供相同的力矩和角度最大化研磨效果。避免使用胶带固定,以免震动过程中松脱影响研磨效果。
8、室温4000g 离心 1min。离心速度视乎离心机参数配置。具备 15ml 离心条件可选步骤,不离心的情况会稍微减少获得上清的量
9、使用 1ml 枪头深入到研磨珠底部吸取上清,并转移到一个干净的 2ml Collection Tube(试剂盒提供)中。

注意:必须把枪头深入到研磨珠底部。多次吸取确保取出所有上清。上清中混入研磨珠不影响后续。根据使用滤膜的类型,约可获得 600-650μl 上清。
这一步发生了什么:从滤膜和研磨珠中获得上清。

1013000g 离心 1min

这一步发生了什么:这一步去除混入的研磨珠、蛋白和细胞碎片。必须去除所有的非 DNA 有机、无机成分, 否则将影响 DNA 纯度并抑制下游 DNA 实验。
11、避开沉淀,转移上清到一个干净的 2ml Collection Tube(试剂盒提供)中。
12、加入 200μl PW2,稍微涡旋混匀,4℃孵育 5min

这一步发生了什么:PW2 溶液为 IRT 技术的又一个重要组成。第二次移除非腐植酸、细胞碎片、蛋白等非DNA 的有机、无机成分。必须去除所有的非 DNA 有机、无机成分,否则将影响 DNA 纯度并抑制下游 DNA 实验。
1313000g 离心 1min

14、避开沉淀转移上清到一个干净的 2ml Collection Tube(试剂盒提供)中。

这一步发生了什么:进一步去除非 DNA 有机和无机物。为了确保 DNA 得率和质量,避免吸入任何沉淀物。

15、加入 650μl PW3,涡旋混匀。

注意PW3 溶液若有沉淀,使用前先 55℃水浴 5-10min,可趁热使用。

这一步发生了什么:PW3 为高浓度盐溶液。DNA 在高盐条件下将选择性地吸附到离心柱硅胶滤膜上。而滤膜上非 DNA 有机无机物仍然有可能少量残留。
16、加载 650μl 上清到一个 Spin Filter 中,13000g 离心 1min。弃去滤液重复上述步骤直到过滤完所有上清。注意:通常需要加样两次。
这一步发生了什么:DNA 选择性地吸附到离心柱硅胶滤膜上,滤液不含 DNA 成分。

17、把 Spin Filter 放到一个干净的 2ml Collection Tube(试剂盒提供)中。

这一步发生了什么:PW3 为高浓度盐溶液,Spin Filter 转移到新的 Tube 管中,等待冲洗步骤,以提高 DNA
得率和纯度。

18PW4 使用前先摇匀。加入 650μl PW413000g 离心 1min

这一步发生了什么:PW4 为含酒精冲洗液,用于冲洗离心柱滤膜上的 DNA。去除残留的盐分等杂质。19、弃去滤液,加入 650μl PW5 溶液,13000g 离心 1min
这一步发生了什么:PW5 能确保完全去除 PW4 成分,可提高 DNA 纯度和得率。

20、弃去滤液,13000g 离心 2min,充分甩干冲洗液。

这一步发生了什么:二次离心去除残留 PW5 溶液。PW5 溶液含酒精,必须充分去除以免影响 DNA 后续实验。
21、把 Spin Filter 放到一个干净的 2ml Collection Tube(试剂盒提供)中。

22、加入 100μl PW6 到离心柱白色滤膜中心。

这一步发生了什么:PW6 溶液(无菌洗脱液)加到滤膜中心湿润整个滤膜。DNA 在高盐条件选择性吸附到硅胶滤膜上,PW6 溶液(10mM Tris)无盐条件下选择性地洗脱下来。
可选:此步也可以用无菌的 DNA-Free PCR Grade Water货号:17000洗脱硅胶滤膜上的 DNAPW6 溶液不含EDTA。若为减少 DNA 降解,可用无菌 TE 溶液代替 PW6 洗脱 DNA
2313000g 离心 1min

24、弃去离心柱。此时 DNA 可直接用于下游实验,无需进一步处理。建议 DNA-20-80℃)保存。PW6 溶液不含 EDTA

 


 

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