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文献和实验
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提供商 ：武汉金开瑞生物工程有限公司
服务名称 ：大肠杆菌蛋白表达
大肠杆菌表达系统是目前最常用，也是最经济实惠的蛋白表达系统，与其他表达系统相比具有遗传背景清楚，目的基因表达水平高，培养周期短，抗污染能力强等特点，是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具。金开瑞的大肠杆菌表达平台可提供全方位的重组蛋白生产服务，在表达包括可溶性蛋白、包涵体、融合蛋白等方面，拥有丰富的经验和专业技术，能解决蛋白表达过程中的各种瓶颈问题。到目前为止，已为全球各地客户提供超过3000种蛋白。
服务优势
1、His、GST、MBP等标签多种表达方式同时进行，确保获得zui优质的蛋白；
2、保证蛋白为普通缓冲可溶；
3、纯化的蛋白经过ELISA，Western-blot，或者其它生物活性验证；
4、可提供详细的表达纯化条件，实验数据以及菌株。
客户提供
目的蛋白信息或基因序列，质粒（也可以选择由金开瑞提供）；
蛋白询价信息表（请点击下载中心，下载蛋白询价信息表后详细填写）。
最终交付
蛋白纯品，纯度90%以上；
蛋白表达结题报告，包括测序报告、实验条件、蛋白表达纯化检测结果。
服务内容
| 服务名称 | 服务项目 | 服务内容 | 交付结果 | 服务周期 |
| 普通型大肠杆菌重组蛋白表达服务 | 质粒构建 | 采用GST、Trx、SUMO、BMP、His、HA、Flag、myc等多种标签载体进行重组载体构建，可采用PTG、阿拉伯糖、热休克、冷休克等多种诱导方式。 | 表达质粒 测序报告 | 1周 |
| 表达菌株筛选 | 转化表达质粒于高效表达E.coli菌株，SDS-PAGE电泳检测挑选合适的单克隆菌株用于目的蛋白表达。BL21 (DE3)、BL21 (DE3) pLys、 Golden、Rosetta(DE3)、 RosettaBlue(DE3)、Rosetta gami B (DE3)、C41、Arctic express等多种宿主菌株供选择。 | 表达菌株 SDS-PAGE图谱 | 3个工作日 | |
| 目标蛋白表达及纯化、标签切除 | 摇瓶培养2-8 L重组阳性克隆诱导目的蛋白表达。通过亲和层析、离子交换、疏水及凝胶过滤等多种技术纯化目的蛋白，也可根据需求切除标签，再纯化获得目的蛋白。 | 大于1mg目的蛋白，纯度最少90%以上 | 2-3周 | |
| 包涵体复性 | 数百种缓冲液及复性条件快速筛选得到最佳复性缓冲液及复性条件。可采用稀释复性、透析复性、柱层析复性等多种技术获得纯度大于90%的包涵体蛋白。 | 大于1mg目的蛋白，纯度最少90%以上 | 2-3周 | |
| 上清保证型大肠杆菌重组蛋白表达服务 | 质粒构建 | 采用pCold-SUMO载体，SUMO标签促溶的同时采用低温诱导方式，促进蛋白的可溶性表达。 | 表达质粒 测序报告 | 1周 |
| 表达菌株筛选 | 转化表达质粒于Arctic express表达菌株，宿主在表达分子伴侣Cpn60和共分子伴侣Cpn10的同时低温诱导提高上清蛋白的表达量，SDS-PAGE电泳检测挑选合适的单克隆菌株用于目的蛋白表达。 | 表达菌株 SDS-PAGE图谱 | 3个工作日 | |
| 目标蛋白表达及纯化、标签切除 | 摇瓶培养2-8 L重组阳性克隆诱导目的蛋白表达。通过亲和层析、离子交换、疏水及凝胶过滤等多种技术纯化目的蛋白，也可根据需求切除标签，再纯化获得目的蛋白。 | 大于1mg目的蛋白，纯度最少90%以上 | 3-4周 |
案例展示
1、GFP原核表达优化：
GFP蛋白原核表达通常以包涵体形式表达，普通光源下，极难观察到绿色荧光。我公司通过对GFP序列进行突变，并对启动子进行筛选，优化培养条件，控制表达速率，用大肠杆菌表达的GFP蛋白，完全以可溶形式表达，自然光下可见强烈的绿色荧光。
2、复性条件筛选：
采用96孔板阵列组合pH、盐浓度、氧化还原对、分子伴侣、表面活性剂等因素。将变性蛋白加入微孔板进行快速稀释复性，快速初筛几百种复性条件。
下图为GFP包涵体采用上述方法进行复性筛选
3、上清保证型蛋白表达：
客户经过尝试在大肠杆菌DE3中表达目的蛋白A，未能获得上清蛋白，金开瑞采用Arctic Express表达体系，采用低温诱导和分子伴侣共表达方式，历经40个工作日，获得了在上清中表达的目的蛋白，得到客户的认可。
客户经过尝试在大肠杆菌DE3中表达目的蛋白B，目的蛋白表达为包涵体，但是客户需要上清表达的蛋白进行后续实验，后经过金开瑞的Arctic Express表达体系，历经35个工作日，获得了在上清中表达的目的蛋白。
金开瑞-提供核酸和蛋白的整体研究方案：
武汉金开瑞生物工程有限公司位于武汉国家生物产业基地，是一家专业致力于为全球制药企业、诊断试剂企业、科研试剂研发企业、高校和科研院所以及大型医院提供蛋白及相关研究技术服务的高新技术企业。六大核心技术平台、专业技术团队，较大程度保证您的项目按时保质的实施。
检测分析平台——免疫学、细胞系、分子生物学检测、双荧光素酶报告基因；
基因服务平台——引物合成、基因合成、DNA提取、载体构建、定点突变；
分子互作研究平台——双萤光素酶报告系统、RNA pull down、RIP/RIP-seq、EMSA等；
蛋白表达平台——提供从基因合成到蛋白表达的一站式服务；
抗体定制平台——单/多克隆抗体、人源化抗体、基因工程抗体、双特异性抗体、修饰抗体、诊断抗体、小分子抗体、抗体对、噬菌体服务。
更多服务内容及优惠活动，详见公司主页：http://www.genecreate.cn/
武汉金开瑞生物工程有限公司
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