FC流式细胞周期检测

提供商 ：BIOCYTO

服务名称 ：细胞周期检测

规格 ：30每管

寄样说明，10管起送，不包邮。可以固定好后直接寄送（实验室负责PI染色）
请备注好数据接收邮箱。非月结客户，需个人垫付实验款后实验，发票报销后退还。
样品制备说明：（固定过夜为宜）
1. 细胞样品的准备：
a. 对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻
用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。
再次收集到离心管内。1000rpm左右离心3-5 分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，
可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50 微升左右的培养液，
以避免吸走细胞。加入约1 毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。
再次加入1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞。
b. 对于悬浮细胞：1000rpm左右离心3-5 分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，
可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50 微升左右的培养液，
以避免吸走细胞。加入约1 毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5 毫升离心管内。
再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50 微升左右的PBS，以避免吸走细胞。
再次加入1 毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞。
2. 细胞固定：取4 毫升冰浴预冷的95%乙醇，低速涡旋震荡的同时逐滴加入1 毫升细胞悬液
（在冰上操作），混匀后4℃固定2 小时或更长时间。固定12-24 小时可能效果更佳。
1000rpm 左右离心3-5 分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，
可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50 微升左右的乙醇，
以避免吸走细胞。加入约5 毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，
可以残留约50 微升左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
3. 碘化丙啶染色液的配制：参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的碘化丙啶染色液：（根据自用调节）
                        1 个样品    6 个样品    12 个样品
         染色缓冲液   0.4ml       2.4ml       4.8ml
碘化丙啶染色液(25X)   15μl         90μl       180μl
RNase A(5mg/ml)       2μl         12μl        24μl
注：配制好的碘化丙啶染色液短时间内可以4℃保存，宜当日使用。
4. 染色：每管细胞样品中加入0.4 毫升碘化丙啶染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30 分钟。
随后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24 小时内完成流式检测，最好能在当日完成流式检测。
5. 流式检测和分析：用流式细胞仪在激发波长488nm 波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。
采用适当分析软件进行细胞DNA 含量分析和光散射分析。

染色完成后制备10XE6每管，约100-200ul 为宜