细菌膜蛋白提取试剂盒

保质期 ：一年

保存条件 ：蛋白酶抑制剂-20℃保存； 蛋白提取液2-8℃保存。

规格 ：50T/100T

1. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
2. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

1. 每500ul抽提液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
2. 将菌液在低温下10000×g离心5分钟，收集菌体，用PBS洗菌体2次。
3. 按每20mg湿重菌体样本加入500ul抽提液A（大约菌体和提取液体积比1:2-1:3，完全淹没菌体即可），混匀，冰上放置2-3小时，中间每隔30分钟振荡混匀30秒。
4. 将菌液在低温下12000×g离心5分钟，取上清。
5. 在上清中加入10ul抽提液B，充分混匀。
6. 在37℃水浴10分钟。
7. 在37℃ 1000×g离心5分钟。
8. 小心吸取管底部大约50ul液体。
9. 用溶解液稀释该溶液，即得细菌膜蛋白样品。该样品可以用Bradford或BCA方法进行定量，调整相应的浓度用于下游实验。