膜蛋白提取试剂盒

保质期 ：一年

保存条件 ：蛋白酶抑制剂-20℃保存； 蛋白提取液2-8℃保存。

规格 ：50T/100T

产品简介：
哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。
膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。本试剂盒提供全套试剂，适用于从细胞和动物组织提取膜蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
本试剂盒提取的蛋白不可用于2D电泳。

使用方法：
使用注意事项：

1. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
2. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
3. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

 

1. 细胞蛋白提取

1. 取5-10×10⁶个以上细胞^①，在4℃，500g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 细胞样品中加入200μl冷的试剂 A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上10-15分钟，中间每隔几分钟涡旋混匀或用移液器吹打混匀。

注：此步如果细胞裂解不充分，下步有大量细胞沉淀，请延长冰浴裂解时间至30分钟或更长，直至细胞充分裂解，中间每隔几分钟充分混匀。

1. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，13000×g条件下离心5分钟。
2. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，37℃水浴5-10分钟，37℃下^②1000g-2000g力离心5分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层是膜蛋白约为20-50μl。
3. 收集上层部分留作备用分析^③。
4. 用150-200μl冰冷的试剂B稀释下层膜蛋白部分，混匀后冰浴2min，37℃水浴5-10分钟，37℃下^②1000g-2000g力离心5分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层是膜蛋白约为20-50μl。
5. 按步骤7再次抽提膜蛋白(此步骤可以选做)。
6. 用50-200μl冷的试剂C稀释下层膜蛋白部分，即得膜蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量^④后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验^⑤。

注：
① 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。由于膜蛋白含量较少，需要较多的细胞才能保证得率。
② 必需保证在37℃左右下离心，至少确保30℃以上。无可控温的离心机时，用常温的离心机在室温离心即可，适当缩短离心时间至2-3分钟。
③ 进行下游实验时，可用试剂C分别稀释上层和下层，取一个上层样品同时进行实验分析。
 

1. 组织蛋白提取
   1. 取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5分钟，小心将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。
   2. 在4℃，500g条件下离心2-3分钟，弃上清。
   3. 按照细胞蛋白的提取方法的第3步骤往下操作即可。
   4. 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。

注意：
蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。