核蛋白提取试剂盒

保质期 ：一年

保存条件 ：蛋白提取液，磷酸酶抑制剂2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存

规格 ：50T/100T

产品简介：
核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
    
使用方法：
使用注意事项：

1. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
2. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

 

• 细胞蛋白提取

1. 提取液制备：每200ul冷的蛋白提取液A和B中分别加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×10⁶个细胞^①，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置冰上15分钟，中间每隔5分钟涡旋振荡或吹打混匀。
5. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，然后在4℃，12000×g条件下离心5分钟，弃上清。
8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。
9. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
10. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
11. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量^②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验^③。

注：
① 细胞数量根据实验情况调整，每次的提取液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
 

• 组织蛋白提取
  1. 提取液制备：每200ul冷的蛋白提取液A和B中分别加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
  2. 取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆^①至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
  3. 在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，弃上清。
  4. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置冰上15分钟，中间每隔5分钟涡旋振荡或吹打混匀。。
  5. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
  6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
  7. 沉淀用PBS洗涤一次，然后在4℃，12000×g条件下离心5分钟，弃上清。
  8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。
  9. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
  10. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
  11. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
  12. 将上述蛋白提取物定量^②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验^③。

注：
①建议用BCA法进行蛋白定量。
②蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。