病毒产品在肺中的应用

首先，如何选择合适的病毒载体：
慢病毒、腺病毒和腺相关病毒（AAV）等都是常用的工具病毒载体，在肺部研究中该如何选择呢？

1.  慢病毒：慢病毒具有毒性低、损伤小的特点，且病毒感染细胞后，可以整合入基因组长期表达，是细胞实验的最佳选择。应用于肺部在体注射时，引起的免疫反应较为温和。
2.  腺病毒：腺病毒滴度高，载体容量大。但应用于在体注射时易引起较强烈的免疫反应，严重时可导致实验动物死亡。
3.  腺相关病毒AAV：AAV 体积小，滴度高，扩散性好，是在体实验的最佳选择。AAV有多种血清型，不同的血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力。AAV5、AAV６和AAV９等对于肺有较高的趋向性。目前，AAV已经应用于肺囊性纤维化的临床实验中。


了解了这些病毒载体在肺部研究中的优势和不足后，如何根据实验目的来挑选合适的基因操作工具呢？建议您可以从以下这几个方面出发：

1.  工具载体的表达时间与实验观察时间是否相符；
2.  工具载体可以容纳的片段大小与目的基因大小是否契合；
3.  工具载体对目的细胞、在体组织的转导是否足够高效。



吉凯小建议：
1.  在基因大小允许的前提下，在体实验建议优先选择腺相关病毒（AAV）。AAV具有滴度高，扩散效果好，免疫原性低等特点。AAV5/6/9血清型对肺有较好的趋向性，其中AAV9在肺部的表达最强，且产生的免疫反应较小。点击了解更多AAV血清型选择小窍门>>



                                                      AAV 血清型的趋向性

2.  细胞体外感染建议选择慢病毒：慢病毒在感染细胞后2-4 天开始表达，且对细胞毒性低、损伤小。
3.  如需目的基因在肺部中特异性表达，可使用组织特异性启动子，如肺上皮细胞特异性启动子SP-C。吉凯提供组织特异性启动子载体的病毒包装服务，点击了解>>

 

病毒工具在肺部的注射方法
肺部病毒感染常用的方法有系统注射（尾静脉注射或腹腔注射）、及鼻内或气管内递送（经呼吸道）等。下面，以鼻内滴注为例做详细说明。

1. 使动物处于足够深的麻醉状态，以防止小鼠运动或对载体的反应而打喷嚏或咳嗽，但也需要防止小鼠麻醉过度而死亡。
2. 将小鼠以背卧姿势固定，并慢慢地将AAV 悬液通过小鼠鼻孔内壁逐滴滴入，为保证最大的肺部感染效率，最小体积为50μL（每个鼻孔25μL），最大体积为75μL（每个鼻孔37.5μL）。待小鼠呼吸恢复正常后，再滴入一次75μL 的AAV 悬液。
3. 将小鼠轻轻从工作台拿下，并将头部和胸部用折叠的纸巾小幅度垫高，以保证小鼠顺畅的呼吸。待小鼠苏醒后，放回鼠笼。
备注：鼻内滴注法是一种直接的AAV 感染法，操作简单且对设备要求低。但AAV 颗粒容易沉积在上呼吸道（鼻道、鼻窦和咽）和胃肠道，如需要有效地感染到下呼吸道，则需要加大AAV剂量。


更多部位病毒体内注射实验操作视频，点击查看>>

用量参考

肺部注射病毒用量参考
以下表格中为吉凯客户应用文献总结（部分）。更多肺部病毒注射参数，点击查看与下载>>

1. 慢病毒



代表文献（38）Cell death & disease,2017,8(1):e2566




2. 腺病毒




代表文献（39）Europenan Respiratory Journal,2010,36(4):907-914




3. 腺相关病毒AAV
代表文献（40）Human Gene Therapy,2007,18(4):344-354




引用文献

1. miR-18a-5p Inhibits Sub-pleural Pulmonary Fibrosis by Targeting TGF-β Receptor II[J]. 2016，Molecular Therapy (IF= 7.008)
吉凯产品：慢病毒。研究领域：肺纤维化。华中科技大学同济医学院附属协和医院
2. Uncoupling protein 2 increases susceptibility to lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice[J]. 2016, Mediators of inflammation (IF= 3.549).
吉凯产品：腺病毒。研究领域：急性肺损伤。陆军军医大学新桥医院