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文献和实验
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保存条件 :4℃
保质期 :1年
英文名 ://
库存 :大量现货
供应商 :普利莱
CAS号 ://
规格 :100ml
描述: RIPA裂解液对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分有较强裂解作用,是常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA 裂解液加强型特别适于western blot和大多数蛋白-蛋白相互作用的实验等。PMSF能抑制蛋白酶对蛋白的降解。储存:RIPA裂解液 100ml 4 ℃保存 PMSF粉末 (100mM) -20℃保存
PMSF溶剂 1ml -20℃保存 以上组分12个月有效
制备细胞裂解产物(预先将PMSF溶剂加入PMSF粉末中混匀,按1:99比例加入RIPA裂解液中)
- 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞,估计细胞离心后的体积(PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV);
- 每50-100 ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液(250-500 ml),冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
- 12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物;
- 假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物。
- 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片,用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS;
- 加入 0.5-1 ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液;
- 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次,直到95%的细胞被破碎,然后在冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
- 12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;
- 假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;
- 20%的甘油保存于 -70oC 或-20oC。
- 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;
- 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取,以避免某些不稳定蛋白的降解;
- PMSF溶液易降解,请于-20oC保存,按比例现用现加。
北京普利莱(APPLYGEN)基因技术有限公司
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