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文献和实验
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保存条件 : 4℃
保质期 :一年
英文名 :Enhanced RIPA Lysis Buffer
库存 :大量现货
供应商 :普利莱
CAS号 ://
规格 :500ml/100ml
描述: 加强型RIPA裂解液加强型对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分有较强裂解作用,是常用的细胞组织快速裂解液。使用加强型RIPA 裂解液特别适于提取膜蛋白以及western blot和大多数蛋白-蛋白相互作用的实验等。储存:4 ℃保存 12个月有效
制备细胞裂解产物
- 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞,估计细胞离心后的体积(PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV);
- 每50-100 ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液(250-500 ml),冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
- 12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物;
- 假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物。
- 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片,用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS;
- 加入 0.5-1 ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液;
- 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次,直到95%的细胞被破碎,然后在冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
- 12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;
- 假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;
- 20%的甘油保存于 -70oC 或-20oC。
- 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;
- 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取,以避免某些不稳定蛋白的降解;
- 在该RIPA裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂。
北京普利莱(APPLYGEN)基因技术有限公司
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