人眼眶/大鼠心肌成纤维细胞  

提供商 ：威斯腾

服务名称 ：人眼眶/大鼠心肌成纤维细胞  

人眼眶/大鼠心肌成纤维细胞
威斯腾生物经过10多年的发展，获得了上百种细胞株和四十余种原代细胞培养经验，并建立了庞大的细胞库及原代培养资料库。细胞平台有资深实验员、规范的SOP操作文件，万级净化细胞房，这些条件为保质保量完成每个客户的实验提供了保障。 同时，威斯腾生物结合多年原代及传代细胞培养经验，结合平台已有的技术优势，建立了完善的体外药筛实验，并引进RTCA(Real-time cellular Analysis，实时无标记细胞记录仪），在药筛过程中，全程实时记录细胞真实状况，为药筛提供最真实精准的实验数据。

无菌操作注意事项
细胞培养一定要保持工作区的无菌清洁，先用紫外灯和臭氧杀菌1h，然后通风30min，操作前需要换细胞间专用拖鞋，双手带上一次性橡胶手套并用75%乙醇消毒，穿上实验服，戴上一次性口罩和帽子，操作时不能大声说话，整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。


甲状腺相关性眼病患的眼眶成纤维细胞原代培养 
（1）无菌条件下，取出结缔组织（人眼眶结缔组织，重庆医科大学附属第二医院提供）后在含2×双抗的预冷的PBS中洗3次。
（2）在PBS中除去脂肪组织，将结缔组织剪成约2mm2小块。
（3）用完全培养基将细胞培养板润洗一遍，待组织稍干后小心贴于细胞培养板上。
（4）将贴有组织的细胞培养板置于细胞培养箱中倒置30min，使组织尽快贴壁。
（5）30min后将完全培养基加入细胞培养板中，刚好没过组织即可，培养数天。
（6）3d后半量换液，隔日观察细胞爬出情况并添加培养基。
约8d后有细胞爬出。



大鼠心肌成纤维细胞原代分离培养
（1）将SD乳鼠在75%酒精中浸泡1-5min，然后固定在泡沫板上，先用碘酒消毒胸腹部，再用酒精消毒。取出无菌剪刀和镊子，先用酒精棉球再次消毒，剪开胸，取心尖部位，快速置于含双抗的预冷的PBS溶液润洗3遍。
（2）剔除周围结缔组织，将心脏置于无菌平皿中，将心脏尽量剪碎，平皿内加入适量0.125%的胰酶，在37度培养箱中，采用分次消化，每次消化5分钟，一共消化8~10次。
（3）每次消化后取上清液，并加入等量的含10%的DMEM/F12培养基，轻轻混匀，中和胰酶的消化，防止消化多度。用100目细胞过滤筛子过滤含细胞的混合液，最后将过滤后的细胞悬液1000R/MIN离心5分钟。离心后收集沉淀，用PBS再次重复离心3次。用细胞培养基将细胞沉淀重悬。于细胞培养瓶中培养。
（4）在培养90分钟左右，将未贴壁的细胞悬液吸出。此时已经贴壁的是心肌成纤维细胞，加入DMEM/F12培养基，放入培养瓶继续培养。
（5）24h换液，并每日观察心肌成纤维细胞的生长。

威斯腾实验服务流程




威斯腾生物服务项目

细胞生物学检测	高通量测序	代谢组学
细胞原代培养	mRNA测序	气相色谱GC/MS
MTT检测	LncRNA测序	液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测	全基因组测序	核磁共震NMR
细胞周期检测	RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验	外显子测序	影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭	16s扩增子测序	Micro-CT
流式分选	Small RNA测序	小动物活体成像
CCK8/XTT检测	宏基因组测序	核磁共振
台盼蓝检测细胞活性	单细胞测序	PET-CT
药物筛选细胞学实验	circleRNA测序
细胞粘附性检测	甲基化测序	基因编辑动物
细胞划痕实验		条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验		全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理检测	CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入	基因芯片
扫描电镜	基因定点突变细胞系	LncRNA芯片
透射电镜	单基因敲除细胞系	miRNA芯片
HE染色	多基因敲除细胞系	mRNA芯片
免疫组化	目的基因敲入细胞系	甲基化芯片（限人和小鼠来源样本）
Tunel（原位末端凋亡法）检测	报告基因敲入细胞系	SNP芯片（限人和小鼠来源样本）
激光共聚焦	miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色	CRISPR/Cas9动物敲除/敲入	科研设计指导&文章评估/润色
原位杂交	基因敲除大鼠/小鼠	科研文献论著翻译
荧光原位杂交	基因敲入大鼠/小鼠	论文翻译润色服务
特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等）		临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测	药物筛选服务项目	药效学评价
旷场实验	高通量自动药物筛选平台	抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测	细胞高内涵药物筛选平台	心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测	蛋白质组学靶标研发平台	泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳	分子药理研究平台	内分泌系统药物药效学评价
	生物膜片钳药物筛选平台	抗炎免疫药物药效学评价
	常规药物体外筛选

【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！