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文献和实验
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库存 :65
英文名 :Magnetic Animal Tissue Genomic DNA Extraction Kit
保质期 :长期
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
保存条件 :RT(15-25℃)干燥条件下,可
规格 :50次|96次
特别提示:包括病毒核酸提取试剂盒(磁珠法)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:病毒核酸提取试剂盒(磁珠法)
英文名称:Magnetic Animal Tissue Genomic DNA Extraction Kit
产品货号:WH0122
产品规格:50次|96次
本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统,从血清、血浆、拭子、组织处理液等样本中分离纯化高质量病毒DNA/RNA。独特包埋的磁珠,在一定条件下对核酸具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的核酸,能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程不涉及有机试剂,安全、便捷,提取的病毒DNA/RNA纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒纯化的核酸可适用于各种常规操作,包括RT-PCR、荧光定量PCR等各种下游实验。
产品特点:
·简单:操作上仅包括样品裂解、磁珠吸附、洗涤及洗脱等几个步骤。
·快速:45分钟左右即可完成一次抽提。
·安全:提取过程无需酚氯fǎng有机物。
试剂盒组成:
组分 | 50次 | 96次 |
裂解液RLCK | 15ml | 60ml |
漂洗液PWC | 18ml | 80ml |
漂洗液PWE | 12ml | 50ml |
Carrier RNA | 310μg | 2×310μg |
Proteinase K | 1ml | 4×1ml |
磁珠悬浮液G | 1ml | 4×1ml |
RNase-Free ddH2O(管装) | 1ml | 2×1ml |
RNase-Free ddH2O(瓶装) | 15ml | 40ml |
储存条件:室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。Carrier RNA冻干粉能够在室温储存至有效期。溶于RNase-Free ddH2O中的Carrier RNA溶液,应置于-20℃冷冻保存;而Carrier RNA溶液加入缓冲液RLCK后,在2-8℃能保存最多48h,请现用现配。
注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。)
1.本产品适用于手工提取或自动化仪器整合。
2.自备试剂:异丙chún,无水乙醇。
3.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的核酸片段较小且提取量降低。
4.若缓冲液RLCK中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。
Carrier RNA溶液的配制如下:
● Carrier RNA溶液:向装有310μg Carrier RNA冻干粉的管子中加入310μl RNase-Free ddH2O,将Carrier RNA彻底溶解,得到终浓度为1 μg/μl的溶液,并按实验情况分装到RNase-Free的离心管中,置于-20℃储存。使用时按照提取的次数取出相应的溶液,该溶液应避免反复冻融,冻融次数不能超过3次。
注意:Carrier RNA冻干粉不能直接溶解于裂解液RLCK中,必须先溶解在RNase-Free ddH2O中,再溶解至裂解液RLCK中。
● Carrier RNA工作液:根据样品的数量计算所需裂解液RLCK和Carrier RNA溶液的体积(见表1,按每310μl RLCK加入2.8 μl Carrier RNA的比例进行配制),将裂解液RLCK与Carrier RNA溶液颠倒混匀,即得到Carrier RNA工作液;为避免溶液出现起泡现象,请勿使用涡旋振荡。
表1.Carrier RNA工作液的配制:
配制数量 | 裂解液RLCK(ml) | Carrier RNA水溶液(μl) |
1 | 0.31 | 2.8 |
2 | 0.62 | 5.6 |
3 | 0.93 | 8.4 |
4 | 1.24 | 11.2 |
5 | 1.55 | 14 |
6 | 1.86 | 16.8 |
7 | 2.17 | 19.6 |
8 | 2.48 | 22.4 |
9 | 2.79 | 25.2 |
10 | 3.1 | 28 |
11 | 3.41 | 30.8 |
12 | 3.72 | 33.6 |
13 | 4.03 | 36.4 |
14 | 4.34 | 39.2 |
15 | 4.65 | 42 |
16 | 4.96 | 44.8 |
17 | 5.27 | 47.6 |
18 | 5.58 | 50.4 |
19 | 5.89 | 53.2 |
20 | 6.2 | 56 |
21 | 6.51 | 58.8 |
22 | 6.82 | 61.6 |
23 | 7.13 | 64.4 |
24 | 7.44 | 67.2 |
操作步骤:
一、手工操作步骤
使用前请先在裂解液RLCK中加入异丙chún,加入体积请按照瓶上的标签。
使用前请先在漂洗液PWC和PWE中加入无水乙醇,加入体积请按照瓶上的标签。
1.取200 μl血浆/血清/淋巴液(样品需平衡至室温)至1.5ml离心管(自备)中。
2.向离心管中加入15 μl磁珠悬浮液G。
注意:为了确保磁珠彻底重悬,请在使用前振荡混匀。
3.向离心管中加入20 μl Proteinase K。
4.向样本中加入300 μl Carrier RNA工作液(配制方法见表1)。盖上管盖,振荡混匀10 sec。
注意:当样本数目比较大时,可以按每300 μl Carrier RNA工作液加入20 μl Proteinase K的比例预先混合,混合后每个样本用量为320 μl,混合后的溶液室温放置不要超过1 h,最好现用现配。
5.室温孵育10min,期间每3 min上下颠倒混匀10 sec,使磁珠和核酸充分结合。简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
6.将离心管放置于磁力架上静置1 min,待磁珠完全吸附时小心去除液体。
7.将离心管从磁力架上取下,加入500 μl漂洗液PWC(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),振荡混匀1 min。
8.将离心管放置于磁力架上静置1 min,磁珠完全吸附后,小心吸去液体。
9.将离心管从磁力架上取下,加入500 μl漂洗液PWE(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),振荡混匀1 min。
10.将离心管放置于磁力架上静置1 min,磁珠完全吸附后,小心吸去液体。
11.重复步骤9和10一次。
12.离心管于磁力架上,56℃晾干5-10min。
注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间,以免难以洗脱核酸。
13.将离心管从磁力架上取下,加入100 μl RNase-Free ddH2O,56℃振荡混匀5 min。
14.将离心管放置于磁力架上静置2 min,待磁珠完全吸附后,小心将核酸溶液转移至一个新离心管(自备)中,并于适当条件保存。
二、磁棒法自动化仪器提取步骤(KingFisher Flex)
使用前请先在裂解液RLCK中加入异丙chún,加入体积请按照瓶上的标签。
使用前请先在漂洗液PWC和PWE中加入无水乙醇,加入体积请按照瓶上的标签。
1.在96深孔板(自备)中加入200 μl血浆/血清/淋巴液(样品需平衡至室温)。
2.每孔加入15 μl磁珠悬浮液G(使用前用移液器吹吸或涡旋振荡混匀磁珠)。
3.每孔加入20 μl Proteinase K。
4.每孔加入300 μl Carrier RNA工作液(为缓冲液RLCK(使用前请先检查是否已加入异丙chún)与Carrier RNA溶液的混合液,配制方法按表1的比例进行配制)。盖上管盖,涡旋振荡10 sec。
注意:当样本数目比较大时,可以按每300 μl Carrier RNA工作液加入20 μl ProteinaseK的比例预先混合,混合后每个样本用量为320 μl,混合后的溶液室温放置不要超过1 h,最好现用现配。
5.按下表将样品和试剂转移DW Plate中,并用标鉴笔标下板的名称。
板的名称 | 96孔板类型 | 成分 | 用量 |
Elution | 深孔板 | RNase-Free ddH2O | 100μl |
Wash 2_2 | 深孔板 | PWE(加入无水乙醇) | 500 μl |
Wash 2_1 | 深孔板 | PWE(加入无水乙醇) | 500 μl |
Wash 1 | 深孔板 | PWC(加入无水乙醇) | 500 μl |
Sample | 深孔板 | Sample | 200 μl |
Carrier RNA工作液 | 300 μl | ||
Proteinase K | 20 μl | ||
磁珠悬浮液G | 15 μl | ||
Tip plate | 深孔板 | Comb(磁力套) |
6.启动KingFisher BindIt 3.2程序,导入Pure Viral DNA_RNA Kit.bdz程序。
7.约33 min后程序执行完毕。
8.取出DNA或RNA样品,用封口膜封好并保存于-80℃。
注:如需整合其它磁棒法或移液法自动化核酸提取仪器请与我司联系。
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