细胞系定制

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细胞系定制

外源质粒DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的蛋白，称稳定细胞系。高质量的稳定细胞系在生物学研究中扮演着非常重要的角色，包括基因功能研究、重组抗体、药物开发等。然而构建一个有效的细胞系是一件复杂而费时的工作。孚博生物作为专业的生物医药研发服务机构，拥有系列稳定细胞系构建专利技术及丰富的哺乳动物细胞培养经验，可以为您提供各种细胞系定制服务。我们已经为世界各地的客户构建了各种各样的定制细胞系，包括基因过表达（Reporter细胞系、GPCR细胞系、离子通道细胞系等）、Knockdown、Knockout细胞系等。我们深知科研工作的时间宝贵，因此致力于提高效率，提供优质高效的细胞系定制服务。我们构建的细胞系可直接应用于各种下游的生物学研究，包括基因调控、蛋白质工程、重组抗体制备、药物研发等。

技术流程

载体构建- 目的基因过表达载体的构建

病毒包装- 表达载体、辅助质粒共转染293FT细胞，收集病毒上清，纯化和浓缩病毒颗粒。若选择转染，则跳过此步。

转染、转导- 电转染或转染试剂（脂质体等）进行细胞转染，或病毒转导。

筛选- 根据表达载体的筛选基因选择药物进行筛选，如嘌呤霉素、G418等。

扩大培养- 将筛选出的单克隆细胞进行扩大培养。

鉴定- PCR、Q-PCR、western等从DNA、mRNA、蛋白水平进行检测。

目的基因合成	1-2周	测序报告
目的基因亚克隆	3-5日	冻干粉质粒、含重组质粒的甘油菌一管、测序报告
病毒包装	1-2周	病毒储存液(>10^8 PFU)、重组后的病毒载体质粒
阳性克隆筛选	2-3周	用于筛选的药物浓度
阳性克隆鉴定	3-5天	阳性细胞株、测序报告、Q-PCR、western检测结果