1. 移除并丢弃培养基。
2. 用0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液短暂冲洗细胞层，以除去含有胰蛋白酶抑制剂的所有痕量血清。
3. 向烧瓶中加入2.0至3.0mL胰蛋白酶-EDTA溶液，并在倒置显微镜下观察细胞直至细胞层分散（通常在5至15分钟内）。
   注意：为了避免结块，在等待细胞分离时，不要通过敲击或摇动烧瓶来搅动细胞。难以分离的细胞可置于37℃以促进分散。
4. 加入6.0至8.0mL完全生长培养基，轻轻吹打吸出细胞。
5. 将适当等分的细胞悬浮液加入到新的培养容器中。推荐使用2×10 3至6×10 3活细胞/ cm 2的接种物。
6. 在37°C孵育培养物。当细胞浓度在6和7×10 4个细胞/ cm 2之间时进行继代培养。

亚培养比例：每周1：6至1:10

中等更新：每2到3天

冷冻培养基：补充有5％（v / v）DMSO的完全生长培养基

储存温度：液氮气相

气氛：空气，95％; 二氧化碳（CO 2），5％

温度： 37°C