产品详情
文献和实验
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库存 :443
英文名 :Magnetic Stool DNA Extraction Kit
保质期 :12个月
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
保存条件 :RT(15-25℃)干燥条件下,可
规格 :50次|200次
特别提示:包括粪便基因组DNA提取试剂盒(磁珠法)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:粪便基因组DNA提取试剂盒(磁珠法)
英文名称:Magnetic Stool DNA Extraction Kit
产品货号:WH0114
产品规格:50次|200次
本试剂盒适用于粪便样本以及肠道微生物的提取DNA。
产品特点:
·操作便捷:能够集中在相对较短时间内完成实验操作。
·高纯度:与磁珠法纯化相结合,提取的DNA纯度高,可直接用于下游实验
试剂盒组成:
组分 | 50次 | 200次 |
缓冲液SA | 45ml | 120ml |
缓冲液SC | 5ml | 25ml |
缓冲液SH | 10ml | 45ml |
缓冲液GFA | 10ml | 30ml |
去蛋白液RD | 24ml | 90ml |
漂洗液PWD | 20ml | 2×40ml |
洗脱缓冲液TB | 15ml | 30ml |
1mm研磨珠 | 15g | 60g |
磁珠悬浮液G | 0.5ml | 2×1ml |
储存条件:室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中孵育10min,以溶解沉淀。
选配试剂:RNase A(10mg/ml) (目录号:WH0217-02)
注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。)
1.新采取的样本会得到更高的得率,不同样本在采样前应先查阅相应的zuì佳保存条件。
2.在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀,否则会影响产物纯度。
3.缓冲液GFA、去蛋白液RD和漂洗液PWD使用前请参照瓶上标签加入相应的醇。
4.过量的DNA可能抑制下游PCR反应,遇到这种情况建议将DNA模板进行稀释后使用。
5.使用前检查缓冲液SC是否有沉淀,若有沉淀,请在37℃加热至完全溶解后使用。
6.粪便样本中可能有RNA残留,如果需要去除RNA,需自备RNase A溶液(目录号:WH0217-02)。
操作步骤:
使用前请先在缓冲液GFA中加入异bǐng醇;在去蛋白液RD和漂洗液PWD中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上标签。
1.样本处理
在2ml离心管中加入样本0.25-0.5g,如果是液态样本则转移200μl至离心管中,加入500μl缓冲液SA、100 μl缓冲液SC和0.25g研磨珠,(粪便样本中可能有RNA残留,如果需要去除RNA,建议再加入10 μl RNase A)涡旋震荡混匀或组织匀质仪震荡混匀后70℃加热裂解15min提高裂解效率。12000rpm (~13400×g)离心1 min,转移上清液(约500 μl)至新的2ml离心管。
注意:对于较难破壁的革兰氏阳性菌,可将温度提高至95℃以促进裂解。
2.加入200μl缓冲液SH混匀,涡旋5 sec,4℃放置10min。
3.12000rpm (~13400×g )离心3 min,转移上清液至新的2ml离心管,加入500 μl缓冲液GFA(使用前请先检查是否已加入异bǐng醇),颠倒混匀。
注意:转移上清时不要移走沉淀,否则可能降低DNA纯度。
4.加入10 μl磁珠悬浮液G,振荡混匀5 min。
注意:为了确保磁珠彻底重悬,请在使用前振荡混匀
5.将离心管放置于磁力架上静置30 sec,磁珠完全吸附后,小心吸去液体。
6.将离心管从磁力架上取下,加入700 μl去蛋白液RD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),振荡混匀5 min。
7.将离心管放置于磁力架上静置30 sec,磁珠完全吸附后,小心吸去液体。
8.将离心管从磁力架上取下,加入700 μl漂洗液PWD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),振荡混匀3 min。
9.将离心管放置于磁力架上静置30 sec,磁珠完全吸附后,小心吸去液体。
10.重复步骤8和9一次。
11.将离心管于磁力架上,室温晾干5-10min。
注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间,以免难以洗脱DNA。
12.将离心管从磁力架上取下,加入50-100 μl洗脱缓冲液TB,振荡混匀,置于56℃,孵育5 min,期间震荡混匀3回,每回3-5次。
13.将离心管放置于磁力架上静置2 min,磁珠完全吸附后,小心将DNA溶液转移至一个新离心管中,并于适当条件保存。
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