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保存条件 : -20℃±5℃,避光保存
保质期 :1年
英文名 :Japanese Encephalitis Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
库存 :35
供应商 :上海晅科生物科技有限公司
CAS号 :/
规格 :50T
日本乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)【产品名称】
商品名称:日本乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)
Name :Japanese Encephalitis Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
日本乙型脑炎,又称流行性乙型脑炎,简称乙脑,是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis,JEV)引起的一种人畜共患传染病。JEV主要是通过带病毒的蚊虫叮咬传播,而猪是JEV的主要增殖宿主和扩散宿主。JEV可引起妊娠母猪发生流产和死胎、公猪发生睾丸炎,新生仔猪发生脑炎、育肥猪持续高热,对养殖户造成巨大的经济损失。日本乙型脑炎广泛存在于世界许多国家,严重威胁着人类的健康。
本试剂盒适用于检测的脑海马回部组织、全血等标本中日本乙型脑炎病毒RNA,适用于日本乙型脑炎病毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。
【检验原理】
本试剂盒用一对日本乙型脑炎病毒特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR技术对日本乙型脑炎病毒RNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
名 称 | 规 格 |
酶液 | 50μL×1管 |
JEV反应液 | 500ul×2管 |
JEV阳性质控品 1.69×10^8拷贝/ml |
50μL×1管 |
阴性质控品 | 250μL×1管 |
1.不同批号试剂不能混用。
2.试剂盒内各试剂组分足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次,有效期12个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
【标本采集】
病死或扑杀动物的脑海马回部组织2g;待检活动物,抽取全血5ml
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
【使用方法】
1.样品处理(样本处理区)
- 样本前处理
- RNA提取
2.试剂配制(试剂准备区)根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;样品每满7份,多配制1份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 | JEV反应液 | 酶液 |
用量 | 20μL | 1μL |
3.加样(样本处理区)将步骤1提取的RNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
4.PCR扩增(核酸扩增区)
- 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;
- 设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;荧光通道选择:
5.推荐循环参数设置:
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
1 | 1 cycle | 42℃ | 20min | 否 |
2 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
3 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
结果分析条件设定设置Baseline和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节),以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
结果判断
阳性:检测通道Ct值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;
可疑:检测通道35 阴性:样本检测结果Ct值>38或无Ct值。
质控标准阴性质控品:Ct>38或无Ct值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤32;
以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
【注意事项】
- 所有操作严格按照说明书进行;
- 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
- 反应液应避光保存;
- 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
- 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
- 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
- 实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
- 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
上海晅科生物科技有限公司
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