幽门螺旋杆菌荧光定量PCR试剂盒价格

库存：12

英文名：Helicobacter Pylori SYBR qPCR Kit

CAS号：/

保质期：一年

供应商：上海晅科生物科技有限公司

保存条件：-20℃保存

规格：50T

幽门螺旋杆菌荧光定量PCR试剂盒简介及特点
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的细菌，也是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类，该细菌会引起幽门螺杆菌病，包括由幽门螺杆菌感染引起的胃炎、消化道溃疡、淋巴增生性胃淋巴瘤等。慢性胃炎和消化道溃疡患者的普遍症状为：食后上腹部饱胀、不适或疼痛，常伴有其他不良症状，如嗳气、腹胀、反酸和食欲减退等。有些患者还可出现反复发作性剧烈腹痛、上消化道少量出血等。据此，专家们认为，及早发现幽门螺杆菌感染者，及时而有效地用抗菌素杀灭幽门螺杆菌，对预防和控制胃癌有重大意义，因此快速检测幽门螺旋杆菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术，本产品就是以荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测幽门螺旋杆菌的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化，灵敏性高。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据人幽门螺旋杆菌高度保守的VP1区设计，不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。本产品只能用于科研。

幽门螺旋杆菌荧光定量PCR试剂盒规格及成分

成分	十孔盒包装
2×Probe qPCR MagicMix	0.5 mL（本色盖）
荧光PCR专用模板稀释液	1 mL（黄盖）
幽门螺旋杆菌PCR引物	100 μL（白盖）
幽门螺旋杆菌qPCR探针	100 μL（棕色管）
幽门螺旋杆菌阳性对照2.0 (1×10E8拷贝/μL)	50 μL（红盖）
DNA释放剂试用装	50次（试用装）
使用手册	1份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。
自备试剂：样品DNA

幽门螺旋杆菌荧光定量PCR试剂盒使用方法
一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3.在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。二、样品DNA的制备
7.如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNAout或柱式细菌DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的DNA释放剂，本产品的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。
三、Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
9.如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：

成分	样品管 N+2个	PCR阴性对照管	标准曲线样品管（2-7管）
2×Probe qPCR MagicMix（本色盖）	10 μL	10 μL	各10 μL
幽门螺旋杆菌 qPCR探针（绿盖）	2 μL	2 μL	各2 μL
幽门螺旋杆菌 PCR引物混合液（白盖）	2 μL	2 μL	各2 μL
待测样品DNA模板	6 μL	不加	不加
第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号）	不加	不加	各6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…）

11.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：

过程	温度	时间
预变性	94℃	5 min
PCR反应（40个循环）	94℃	0.5 min
	50℃	0.5 min（采集FAM通道的荧光信号）
	72℃	0.5 min
最后延伸	72℃	min

五、数据处理
12.以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
六、电泳检测
13.如果有必要电泳确认，可取10-20μL PCR产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的大小为400 bp。但电泳非常容易污染实验环境，建议不轻易采纳。