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文献和实验
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库存 :现货
英文名 :Sciben
供应商 :南京善本
规格 :100T
自噬体MDC染色试剂盒
产品描述:
自噬(Autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器,最终将吞食物在溶酶体内降解的过程,自噬体(Autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物,损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。
自噬体MDC染色试剂盒是应用一种嗜酸性荧光色素—单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC)用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂,其检测激发滤光片波长355 nm,阻断滤光片波长512 nm。自噬体MDC染色试剂盒(简称MDC法)适用于实验研究中悬浮或贴壁的细胞自噬体染色,又称为MDC染色液。
包装说明:
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一、悬浮细胞
- 用去离子水稀释10×Wash buffer至1×Wash buffer工作液。
- 收集细胞,800 g离心5 min,去除上清液,然后用500 μl的1×Wash buffer Wash buffer工作液清洗细胞1次,离心弃上清液。
- 加入适量的1×Wash buffer重悬细胞,计数并调节细胞浓度至106/ml。
- 取适量90 μl的细胞悬液至新的EP管中,加入10 μl的MDC Stain染色,轻轻混匀。
- 37℃避光染色10~30 min。
- 离心(800 g,5 min),去除上清液,收集细胞用500 μl的1×Wash buffer清洗细胞2次,离心弃上清液。
- 加入100 μl的Collection buffer重悬细胞,取适量(建议10~30 μl)滴加于载玻片上并加盖玻片。
- 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355 nm,阻断滤光片波长512 nm),拍照、荧光强度分析或计数每个细胞中的自噬体数量。
二、贴壁细胞(适用于12孔板,对于使用6孔板各试剂用量需加倍)
1、MDC Stain和EB试剂有一定毒性请小心操作。
2、向板孔中打入液体时,务必动作轻柔,以免将细胞吹起。
3、操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 用去离子水稀释10×Wash buffer至1×Wash buffer工作液。
- 配制MDC stain染色工作液(1×Wash buffer:MDC=10:1)
- 含有细胞的培养板每孔加入500 μl 1×Wash buffer清洗细胞1次,然后移去清洗液。
- 每孔加入100 μl MDC stain染色工作液,37℃避光染色10-30 min。
- 用500 μl 1×Wash buffer清洗细胞2次,移去清洗液。
- 加入100 μl/孔Collection buffer。
- 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355 nm,阻断滤光片波长512 nm),拍照、荧光强度分析或计数每个细胞中的自噬体数量。
染色结果举例:
PC12细胞在镉处理12 h后使用自噬体MDC染色试剂盒群体细胞荧光强度成像拍照(上图);Raji细胞培养48 h和PC12培养24 h后使用自噬体MDC染色试剂盒单个细胞内自噬体数量表现(下图)
注意事项:PC12细胞在镉处理12 h后使用自噬体MDC染色试剂盒群体细胞荧光强度成像拍照(上图);Raji细胞培养48 h和PC12培养24 h后使用自噬体MDC染色试剂盒单个细胞内自噬体数量表现(下图)
1、MDC Stain和EB试剂有一定毒性请小心操作。
2、向板孔中打入液体时,务必动作轻柔,以免将细胞吹起。
3、操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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