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文献和实验
相关推荐
供应商 ：细工生物
英文名 ：Epithelial cell culture Kit
运输方式 ：-20
细工生物推荐配方（全部即用现货）：DMEM/F12 细工生物 货号：12-719F 价格：120元 （美国定制生产，保种体系试剂）
胎牛血清 细工生物 货号：cc-3007.03-25ml 价格：400元 （美国定制生产，保种体系试剂，应用在原代细胞中，代数与状态表现更优）
EGF 细工生物 货号：cc102-100ug 价格：478元（多家品牌，常年筛选统计后推荐，保种体系试剂）
EGF 细工生物 货号：cc102-1ML 价格：2868元（多家品牌，常年筛选统计后推荐，保种体系试剂）
BPE 细工生物 货号：cc023-1ML 价格：352元（多家品牌，常年筛选统计后推荐，保种体系试剂，gibco体系LONZA体系培养基添加后方案更优）
BPE 细工生物 货号：cc023-10ML 价格：2464元（多家品牌，常年筛选统计后推荐，保种体系试剂，gibco体系LONZA体系培养基添加后方案更优）
insulin 细工生物 货号：cc101-5MG 价格：225元（多家品牌，常年筛选统计后推荐，保种体系试剂）
insulin 细工生物 货号：cc101-50MG 价格：975元（多家品牌，常年筛选统计后推荐，保种体系试剂）
hydrocortisone 细工生物 货号：cc103-1ml 价格：47元（多家品牌，常年筛选统计后推荐，保种体系试剂）
Amphotericin B 细工生物 货号： CC002-3 价格：300元(推荐为原代细胞培养开发，与常规两性霉素B不同处是，水溶级别（目前市场常用是DMSO溶，原料成本相差几十倍，效果更优）
以上成套按最小规格报价
推荐：
增强型贴壁试剂 细工生物 货号：CAT:C028 价格：300元(推荐为原代细胞培养开发，原代案例，心肌细胞，神经元，胶质细胞）
Optimized Trypsin细工生物 货号：cat:cc17.3 价格：150元（多家品牌，常年筛选统计后推荐，保种体系试剂，原代细胞，适合半悬半贴细胞）
注：低浓度胰酶是我司一直推荐浓度，随费时，后续细胞状态更优，减少机械力，胰酶化学作用消化可解决细胞成团，团聚等问题，少量黑点一般是吹打力过度，损伤细胞破碎后碎片引起，注意这步，黑点明显会消失，成片黑点，建议换血清与培养基体系）
thle-3（atcc-crl-11233）细胞系是由原代正常肝细胞经sv40大t抗原感染而获得--案例分析及建议
THLE-3细胞几点建议您参考。
消化：不要有机械力 化学作用让细胞消化散 我们统计胰酶只有少数能达到这个要求 这点不知是否有注意到 我们的OPTI胰酶符合这个要求
分析配方建议是：3170+fbs我们在其他几株原代上皮有应用确实能解决问题 ATCC列出这个配方说明他们也存在很难的增殖情况才加血清方案解决
关于贴壁：我们意见是这只细胞也是像293T一样转染的大T抗原 这只也有贴壁不牢的问题 更为严重 所以用很多铺板试剂 类似案例我们解决过LMH细胞
这只要用明胶 我们替换其他方案解决的，ATCC这个铺板试剂与程序及不稳定，我们建议用我们增强贴壁试剂试试。（如非要按ATCC说明做，我们建议都用GIBCO的）ATCC方案也是较繁琐，建议用我们增强贴壁试剂替换（还无案例）
因子：关于上皮细胞添加我们意见是BPE its 不了解成份作用的老师一定要慎重加减，推荐理由是其他几株上皮我们统计有这几个因子都有方案用过。
专利来源 -这些添加因子 符合我跟您说牛脑垂体添加 氢化可的松等添加在以下文段都有说明。
Cell proliferation is measured in a variety of the experiments described below. Thus, the methods used for such measurement are setforth as general methods. DNA synthesis is measured in cells inoculated at clonal density (100 cells/cm.sup.2). The medium is changed to fresh medium the next day and after two additional days of incubation [.sup.3 H]-thymidine (New England Nuclear) is added to the cell cultures at 0.5 .mu.Ci/ml. Twenty-four hours later the acid precipitable fraction is collected on glass fiber filters and the amount of [.sup.3 H] incorporated is quantified by scintillation counting. Alternatively, proliferation is measured by counting the number of cells in each colony. Medium is changed to the medium in which proliferation is to be assayed one day following inoculation at clonal density and the dishes are incubated for a further 7 days. The cells are then formalin fixed and stained with crystal violet. The number of cells per colony is determined and the population doublings per day is calculated as previously described (13)
血清质量相关推荐：种子库长期评测统计
半量换液-理由来源如下两点
一：专利介绍 -通过查专利要求以下段，符合我跟您说的半量换液
Harris CC, et al. Human liver epithelial cells. US Patent 5,759,765 dated Jun 2 1998 --专利名称
2) culturing one-half of cells of step (1) in a medium containing said compound to be evaluated;
3) culturing the remainder of the cells of step (1) in a medium lacking said compound to be evaluated;
二：ATCC crl11233 介绍
The cells express cytokeratin 18 and albumin in early passage, whereas higher-passage cells in logarithmic-phase growth also express ytokeratin 19.Ref -ATCC crl11233 介绍
欢迎技术交流，该类细胞培养问题常年统计。（组织保存，消化，培养）
国内细胞状态统计一些小建议-血清
高质量的血清：应该是细胞出现问题能解决问题，并能持续保证质量一贯性。
与很多老师意见：其他细胞都能养活，就这个细胞养不好。正好相反，建议评审条件正好相反。如能长期关注这种问题，筛选出的血清质量结果也是最可靠的，就像我们出现问题能想到的那款血清，为啥这款血清能够完成几乎所有问题解决，几十年质量一致性，批间差几乎为零。这种血清才是高质量血清。
欢迎与常年从事细胞质量要求高的实验室一起解决各种问题，目前技术、试剂、设计、方法已相对成熟。国内从从细胞建系开始的技术试验已经非常成熟了，我司目前目前跟踪统计的原代细胞建系思路设计及实验已经有几年了，真正的成熟还要做很多的工作。我司十年的基础实践统计，欢迎您的参与与提携。
进展20210917：原代建系要求技术全面性，
用国内库建的细胞系在建系，先摸条件相对容易，成功率会大很多，统计跟踪过几个用户统计跟踪过，养十几代没问题（有几个新手也能养不少代）离体后处理这步也挺难的，肝上皮建系我们一直在统计，ATCC那几个成熟系在国内养的不是很好，统计很多年了，看了部分介绍，其他几个正常组织细胞系养的也不是很顺利，几点关键问题可讨论，密度抑制，贴壁不牢，容易成团，保种不成功，是传代几个较关键问题，离体处理，消化，冻存，这几部用的试剂手法，我们一直在优化，有机会寄试用可比较
二倍体跟原代类似，最好把问题及上下操作步骤列下，我回复下，不然说的较多，不知你需要的那个重点，或者问题重点。沟通前建议都是较好的试剂耗材，不然沟通不准确
例如培养基相关，DMEM-F12很特殊协和库老师很多年前给的参考是现用现配比成品好用，测试统计十几年，还是弄不出进口厂家一样的培养基，这个是我们今年解决的重点。
例如转染相关免疫悬浮类（原代类）难点，转染，容易成团，保种难，对试剂手法都很挑剔，
我们有试剂，手法，和理由都可说明后，您在上实验比较，细胞状态取好方向，最能说明问题。
20211101：统计巨噬相关培养建系，分布在各组织中巨噬也被称为类上皮，通过统计学习到，国外研究在畜牧行业已经非常成熟了。希望与各位高手请教提携合作。我们在基础培养上有些优势，希望合作国内巨噬建系相关合作。国内各细胞库建系经验也不比国外差了。
20231220：基于DMSO优化后，针对二倍体系，原代，类器官单细胞冻存（球体冻存难度大），免疫类细胞原代，系优化，PBMC等，目的提高常年后液氮冻存种子活率。
20230116细胞中问题痛点参考，养原代有积极意义。
系问题关于黑点，系生长慢参考
问题关于黑点
细工建议参考，用对试剂耗材（种子库级别细胞不建议用便宜试剂，保种上百只种子细胞，也用不了多少钱的）胰酶轻柔处理（避免枪直接吹打细胞损伤也是较重要指标参数），几代或十几代后，黑点会全部消失。这个建议也只是救助办法参考建议，经历过黑点的细胞，建议重新保种国内正规库来源细胞。
系生长慢参考
细工建议参考 给出方案是进口瓶培养（康宁，nunc,德国产细工全部现货） ，种子库级别试剂（三千以上胎牛，我司验证五年以上南美）我司培养基或者是GIBCO培养基，放足培养基（多些也没关系）几天不动，看下恢复情况，结合我司胰酶（无损消化）传几代应该能找回较好状态，该方法也适合细胞养几代后就爬爬这种情况（上述方法也适合细胞养传代后细胞就爬爬这种情况，该因素原因很多，具体情况集体分析）该方法也建议原代首代培养（类器官）就是普通培养基加胎牛（因子贵，lag phase长、无血清不稳点）全部能替代，细胞够多或稳定后在上无血清可做参考。类器官配套耗材U型低（不加辅助条件成球）及磁珠配套磁力成球可来信告知索取资料及技术讨论。邮件联系
上述思路解决要顺利，来信告知，目前统计进口试剂耗材成功案例，有细胞生长慢，黑点案例都误认为是支原体，合作实验室比较熟悉培养体系，应用后，任何问题都没有，就是复苏初期老师比较心急，没按正常传代后，皿居多，三天以上后，pH变化较快，影响了后面生长。如验证，到任何问题难点都可来信讨论。如有理想趋势生长，胰酶建议用0.05或者我司胰酶（上皮类成片解决要柔和，常规0.25浓度容易消化成细胞泥，膜损伤厉害，对细胞损伤很大，影响救助）
上述适合以下问题备份组 我们会统计更多难点应用有
成瘤不理想细胞株
耐药株复苏救助
细胞养几代后就爬爬这种情况
该理由来自类器官培养统计，及下面各类难养株常年统计，下面内容有需要的可来信告知。我发您，要有针对的痛点难点，我们会补充更多资料。
救助细胞系建议来源国内正规库，公司来源差很多。如照顾我司生意长期订购试剂，我们可送国内库同类细胞株做奖励，我司今年试剂所有原料都是临床原料级别。能到种子库级别。
如验证顺利，细节图片及细节能否发在丁香园这个链接里，我们统计内容也为更好服务每一位用户少走弯路。我们还有相应的奖励。
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【原创】共同探讨完成国内细胞统计
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