骨髓细胞培养基

【检验原理】可以支持原代骨髓细胞短期培养，在中期阶段加入有丝分裂抑制剂，阻止有丝分裂，提供后续检测，如染色体核型分析。
【主要组成成分】含有谷氨酰胺的RPMI-1640基础培养基、胎牛血清、抗生素
【适应范围】骨髓体外增殖培养。
【储存条件及有效期】
  培养基应贮存在-20℃，有效期为2年，溶解后应存放于2-8℃，并于10天内使用。 存放及使用时注意避光。
【生产日期与失效日期】详见产品标签
【使用仪器】显微镜、二氧化碳细胞培养箱、离心机
【样本要求】新鲜骨髓细胞
【检验方法】
 
1.  种骨髓：向装有10ml培养基的玻璃或塑料瓶中接种0.5ml的骨髓穿刺液，轻轻转动培养管使混合。
2.  培养：置37℃二氧化碳细胞培养箱培养72小时。
3.  终止培养：向每个培养管中加入秋水仙酰胺溶液，终浓度为0.1ug/ml，静置15-30分钟。
4.  收获细胞：将培养液转移至离心管中，离心力500g，离心5分钟。
5.  低渗处理：除去上清液，加入5-10ml 0.075M KCl溶液重新悬浮细胞，37℃孵化10-12分钟。
6.  离心：500g，离心5分钟，弃去上清液。
7.  固定：固定液为醋酸：甲醇=1:3，每个离心管中逐滴加入新鲜配制的、预冷的固定液5-10ml。置于4℃10分钟。
8.  再固定：重复步骤6和7。
9.  滴片：加入0.5-1ml固定液制成悬液。用吸管吸取细胞悬液，滴至干燥洁净的载玻片上，空气中晾干。
10.   经吉姆萨染色处理后做染色体核型分析。
【参考值（参考范围）】细胞倍增指数大于2
【检验结果的解释】细胞培养时间、加入秋水仙酰胺的量以及低渗操作时间对结果影响较大，如发现制片所得的分裂相较少，需要对实验条件及样品进行确认。
【检验方法的局限性】仅用于骨髓细胞培养。
【产品性能指标】
1.  装量差异限度：±3%
2.  澄清度：澄清
3.  PH值：7.2-7.6
4.  渗透压（mOsm/kg）：280-320
5.  无菌检测：无菌
6.  内毒素（EU/ml）：＜10
7.  细胞生长实验：细胞倍增指数大于2



产品官网链接：https://www.bioind.com/worldwide/bone-marrow-karyotyping-medium/