BCA蛋白定量试剂盒

产品描述
BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu⁺，Cu⁺与BCA试剂形成紫颜色的络合物，在562 nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。测定其在562 nm处的吸光值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。该方法快速灵敏、稳定可靠且对不同种类蛋白质变异系数很小。试剂盒中提供了浓度稳定的蛋白标准品用于制作标准曲线。
BCA 蛋白定量试剂盒可用于试管法检测，也可用于微孔板法检测。试管法需较大量蛋白样品(100 μL)和工作液(2 mL)，蛋白样品与 BCA 工作液的比率为1:20(v/v)，蛋白质测定范围为20-2000 μg/mL，采用加强法可以检测到 5 μg/mL；微孔板法操作简单方便，仅需少量(10-25 μL)的蛋白样品和工作液(200 μL)，蛋白样品与工作液的比率为1:20(v/v)或者1:8(v/v），蛋白质测定范围为 20-2000 μg/mL，采用加强法可以检测到 5 μg/mL。
我司提供的 BCA 蛋白浓度检测试剂盒，比色皿法分别可做125次，酶标法可做1250次。
订购信息

产品名称	货号	规格
BCA蛋白定量试剂盒	AP12L025	500T

产品组分

货号	组分	规格
AP12L025	BCA 试剂 A	100mL
	BCA 试剂 B	5mL
	BSA 标准品 2 mg/mL	2*1mL

运输与保存
常温运输。常温保存，有效期12个月。
使用方法
一、配制标准品和工作液

配制 BSA 标准品体系（线性范围20-2000 μg/mL或者5-250μg /mL标准品制备各2种配置方法，请根据习惯选用恰当方式）。【注】：BSA 标准品浓度为2 mg/mL，稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用水或 1 X PBS 进行稀释。

BSA 标准品体系配制表（配制后可放置于4℃ 冰箱多次使用）

表1.微孔板检测BSA 标准品体系配制（线性范围 20-2000 μg/mL）配置方法一

Vial	稀释液体积(μL)	BSA标准品体积(μL)	BSA终浓度(μg/mL)
A	0	100	2000
B	25	75	1500
C	50	50	1000
D	83	50	750
E	75	25	500
F	140	20	250
G	150	10	125
H	158	2	25
I	100	0	0=Blank

表2.微孔板检测BSA 标准品体系配制（线性范围 20-2000 μg/mL）配置方法二

Vial	稀释液体积(μL)	BSA标准品体积(μL)	BSA终浓度(μg/mL)
A	0	BSA 标准液100	2000
B	25	BSA 标准液75	1500
C	65	BSA 标准液65	1000
D	35	Vial B 35	750
E	65	Vial C 65	500
F	65	Vial E 65	250
G	65	Vial F 65	125
H	80	Vial G 20	25
I	80	0	0=Blank

表3.BSA标准品体系（微孔板检测，线性范围 5-250μg /mL）配置方法一

Vial	稀释液体积(μL)	BSA标准品体积(μL)	BSA终浓度(μg/mL)
A	70	10	250
B	75	5	125
C	78	2	50
D	79	1	25
E	399	1	5
F	80	0	0

表4.BSA标准品体系（微孔板检测，线性范围 5-250μg /mL）配置方法二

Vial	稀释液体积(μL)	BSA标准品体积(μL)	BSA终浓度(μg/mL)
A	70	BSA 标准液10	250
B	40	Vial A 40	125
C	45	Vial B 30	50
D	40	Vial C 40	25
E	40	Vial D 10	5
F	40	0	0

2. 配制 BCA工作液
(1) 计算所需要的总BCA 工作液体积。总BCA工作液体积=（标准品数量+待测样品数量）x重复数x每个样品所需要的BCA 工作液。【注】：试管法检测时每个样品加 2.0 mL BCA 工作液，微孔板检测每个样品加200 μL BCA 工作液。
(2) 配制BCA工作液：50 体积的BCA 试剂 A 中加入1 体积的BCA 试剂B（A:B=50:1），充分混匀。【注】：BCA工作液装入密封容器内，室温条件24h 稳定。

二、检测方法
1. 试管检测方法（样品:BCA工作液=1:20）
(1) 各取100 μL 标准品和待测样品加入到反应管中。
(2) 每管加入2.0 mL BCA 工作液，混匀。根据待测样品的浓度范围选择孵育时间和温度。
标准孵育方法：37℃ 孵育30 min 或者室温2h（检测范围：20-2000 μg/mL）
增强孵育方法：60℃ 孵育30 min（检测范围：5-250 μg/mL）
【注】：BCA 检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应，但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低，可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。
(3) 冷却到室温。在分光光度计上进行检测，设定波长为 562 nm，在10 min内对所有样品读数。【注】：由于BCA 反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是10 min 内能对所有的样本进行 562 nm 吸光度的测试，不会导致明显错误。
(4) 根据BSA 标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度μg/mL；Y-最终的OD 562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
2. 微孔板检测方法（样品: BCA工作液=1:20）
(1) 各取10 μL标准品和待测样品加入到微孔板中。【注】：样品与工作液比例为1:20，检测范围为125-2000 μg/mL。若样品浓度非常低，可使用25μL 标准品和待检测样品进行检测（即1:8），这时试剂盒的检测范围为 20-2000 μg/mL。
(2) 每孔加入200 μL BCA 工作液，枪头吹打充分混匀。盖上微孔板，37℃ 孵育30 min。
(3) 冷却到室温，在酶标仪上的562 nm 波长范围处检测吸光度。
(4) 根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（ X-蛋白浓度μg/mL；Y-最终的OD 562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

注意事项