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黄曲霉毒素M1 ELISA快速检测试剂盒
【产品概述】
黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性. 黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的代谢产物。经摄入含有黄曲霉毒素B1饲料的奶牛产出的牛奶中，其中便含有黄曲霉毒素M1。由于黄曲霉毒素M1相当稳定，巴氏灭菌法也无法将其杀灭，所以检测黄曲霉毒素M1不仅要在饲料原料中检测，而且在最终产品中也需要进行鉴定。用ELISA法可快速准确地检测牛奶，酸奶和奶粉中的Aflatoxin M1。
本产品是利用免疫竞争法检测原理建立的一种定量检测试剂盒。具有简单、快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在农场、饲料混合车间等实地进行测定。结果准确，灵敏度度为0.05ppb，准确率大于90% 。适用于牛奶、酸奶、奶粉以及奶酪中的Aflatoxin M1的检测。
【产品特性】
1）试剂盒灵敏度: 0.05 ppb
2）检测范围：牛奶0.1ppb---2ppb
酸奶0.1ppb---2ppb
奶粉0.5ppb---10ppb
奶酪0.5ppb---10ppb
3）试剂盒变异系数：小于20%。
4）试剂盒准确度：回收率范围在80％-110％之间。
【试剂盒组成】
1）包被有抗体的96微孔板：1块（96 孔，12 条×8 孔）
2）黄曲霉标准品：0 ng/ml 、0.05 ng/ml
0.1 ng/ml、0.25 ng/ml、0.5 ng/ml、1.0 ng/ml；1瓶× 1.0ml
3）60×酶标记物浓缩液： 1 瓶× 0.20ml
4）10× 浓缩洗涤液： 1 瓶× 50ml
5）酶标稀释液： 1瓶×30ml
6）稀释缓冲液： 1 瓶×50ml
7）显色底物液： 1 瓶×13ml
8）反应终止液： 1 瓶× 7ml
9）试剂盒说明书
【仪器】
—酶标仪450nm
—高速离心机
—微量移液器20μl～200μl，100μl～1000μl
—刻度移液管
—天平：感量0.01g
—10ml离心管
—50ml离心管
【样本的前期处理】
1. 牛奶
----取牛奶2ml样品，用冷冻离心机（4000RPM ，10℃）离心10min去除脂肪（如没有冷冻离心机，可将样品先冷却到10℃，再离心）
----离心后用移液器彻底去除上层奶油。
----取下层脱脂牛奶，用稀释缓冲液1:1稀释，取100μl用于检测
稀释倍数为2
2. 酸奶
----取酸奶样品2g，用冷冻离心机（4000RPM ，10℃）离心10min （如没有冷冻离心机，可将样品先冷却到10℃，再离心）
----离心后，取上层澄清液，用稀释缓冲液1:1稀释，取100μl用于检测
稀释倍数为2
3. 奶粉
-----用天平称取2g奶粉到锥形瓶中，再加入50℃左右去离子水到10ml（还原牛奶）
----用力震荡3min，使充分溶解
----按照1.牛奶样品处理步骤进行
稀释倍数为10
4. 奶酪
----用天平称取2g粉碎的奶酪放入离心瓶中，加入40ml二氯甲烷，充分溶解混匀后，剧烈震荡15min
----过滤，取10ml，60℃氮气吹干
----分别加入0.5ml甲醇，0.5ml PBS，1ml庚烷复容
----离心2700r/min 15min
----完全去除上层庚烷
----取下层，用稀释缓冲液1:4（5倍）稀释，取100μl用于检测
稀释倍数为10
【操作流程】
1. 测定之前注意事项
1) 使用前将所有试剂平衡至室温（20-25℃）。
2) 使用后迅速将试剂放入2-8℃冷藏。
3) 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4) 所有孵育过程应避免阳光直射，并按要求用盖板覆盖住酶标板。
2. 溶液的配制
1）pH7.4 PBS溶液配制：NaCl 8.00g，KCl 0.20g，KH2PO4 0.20g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，加纯净水/蒸馏水溶解，定容到1000ml。
2）酶标记物的配置：根据实验所需的量用PBS溶液将酶标抗体浓缩液60倍稀释后使用
3）洗涤液的配制：将浓缩洗涤液用去离子水稀释10倍后使用（1份浓缩洗涤液加9份蒸馏水）
3. 测定程序
1）将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶标板架，标准品和样品做两个平行实验，记录下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔袋封好置2-8℃冷藏保存。
2）分别吸取100μl 标准品和样品加至相应的微孔（双孔）中，在37℃温育30min。
3）倒出孔中的液体，每孔加入250μl 稀释好的洗涤液洗涤，重复操作四次。洗板时每次间隔30s，洗完后用力在吸水纸上排干。
4）每孔加入酶标100μl，装入袋中密封，37℃温育20min。
5）重复步骤3，反复洗涤四次。
6）每孔加入100μl显色底物液，装入袋中密封，37℃避光温育10min。
7）每孔加入50μl 反应终止液，混匀。
8）测量O.D.450nm 值。测定2－3次，取平行较好数值用于计算。
【计算结果】
1）所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
【产品概述】
黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性. 黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的代谢产物。经摄入含有黄曲霉毒素B1饲料的奶牛产出的牛奶中，其中便含有黄曲霉毒素M1。由于黄曲霉毒素M1相当稳定，巴氏灭菌法也无法将其杀灭，所以检测黄曲霉毒素M1不仅要在饲料原料中检测，而且在最终产品中也需要进行鉴定。用ELISA法可快速准确地检测牛奶，酸奶和奶粉中的Aflatoxin M1。
本产品是利用免疫竞争法检测原理建立的一种定量检测试剂盒。具有简单、快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在农场、饲料混合车间等实地进行测定。结果准确，灵敏度度为0.05ppb，准确率大于90% 。适用于牛奶、酸奶、奶粉以及奶酪中的Aflatoxin M1的检测。
【产品特性】
1）试剂盒灵敏度: 0.05 ppb
2）检测范围：牛奶0.1ppb---2ppb
酸奶0.1ppb---2ppb
奶粉0.5ppb---10ppb
奶酪0.5ppb---10ppb
3）试剂盒变异系数：小于20%。
4）试剂盒准确度：回收率范围在80％-110％之间。
【试剂盒组成】
1）包被有抗体的96微孔板：1块（96 孔，12 条×8 孔）
2）黄曲霉标准品：0 ng/ml 、0.05 ng/ml
0.1 ng/ml、0.25 ng/ml、0.5 ng/ml、1.0 ng/ml；1瓶× 1.0ml
3）60×酶标记物浓缩液： 1 瓶× 0.20ml
4）10× 浓缩洗涤液： 1 瓶× 50ml
5）酶标稀释液： 1瓶×30ml
6）稀释缓冲液： 1 瓶×50ml
7）显色底物液： 1 瓶×13ml
8）反应终止液： 1 瓶× 7ml
9）试剂盒说明书
【仪器】
—酶标仪450nm
—高速离心机
—微量移液器20μl～200μl，100μl～1000μl
—刻度移液管
—天平：感量0.01g
—10ml离心管
—50ml离心管
【样本的前期处理】
1. 牛奶
----取牛奶2ml样品，用冷冻离心机（4000RPM ，10℃）离心10min去除脂肪（如没有冷冻离心机，可将样品先冷却到10℃，再离心）
----离心后用移液器彻底去除上层奶油。
----取下层脱脂牛奶，用稀释缓冲液1:1稀释，取100μl用于检测
稀释倍数为2
2. 酸奶
----取酸奶样品2g，用冷冻离心机（4000RPM ，10℃）离心10min （如没有冷冻离心机，可将样品先冷却到10℃，再离心）
----离心后，取上层澄清液，用稀释缓冲液1:1稀释，取100μl用于检测
稀释倍数为2
3. 奶粉
-----用天平称取2g奶粉到锥形瓶中，再加入50℃左右去离子水到10ml（还原牛奶）
----用力震荡3min，使充分溶解
----按照1.牛奶样品处理步骤进行
稀释倍数为10
4. 奶酪
----用天平称取2g粉碎的奶酪放入离心瓶中，加入40ml二氯甲烷，充分溶解混匀后，剧烈震荡15min
----过滤，取10ml，60℃氮气吹干
----分别加入0.5ml甲醇，0.5ml PBS，1ml庚烷复容
----离心2700r/min 15min
----完全去除上层庚烷
----取下层，用稀释缓冲液1:4（5倍）稀释，取100μl用于检测
稀释倍数为10
【操作流程】
1. 测定之前注意事项
1) 使用前将所有试剂平衡至室温（20-25℃）。
2) 使用后迅速将试剂放入2-8℃冷藏。
3) 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4) 所有孵育过程应避免阳光直射，并按要求用盖板覆盖住酶标板。
2. 溶液的配制
1）pH7.4 PBS溶液配制：NaCl 8.00g，KCl 0.20g，KH2PO4 0.20g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，加纯净水/蒸馏水溶解，定容到1000ml。
2）酶标记物的配置：根据实验所需的量用PBS溶液将酶标抗体浓缩液60倍稀释后使用
3）洗涤液的配制：将浓缩洗涤液用去离子水稀释10倍后使用（1份浓缩洗涤液加9份蒸馏水）
3. 测定程序
1）将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶标板架，标准品和样品做两个平行实验，记录下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔袋封好置2-8℃冷藏保存。
2）分别吸取100μl 标准品和样品加至相应的微孔（双孔）中，在37℃温育30min。
3）倒出孔中的液体，每孔加入250μl 稀释好的洗涤液洗涤，重复操作四次。洗板时每次间隔30s，洗完后用力在吸水纸上排干。
4）每孔加入酶标100μl，装入袋中密封，37℃温育20min。
5）重复步骤3，反复洗涤四次。
6）每孔加入100μl显色底物液，装入袋中密封，37℃避光温育10min。
7）每孔加入50μl 反应终止液，混匀。
8）测量O.D.450nm 值。测定2－3次，取平行较好数值用于计算。
【计算结果】
1）所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
| 百分吸光度值（%）＝ | B | ×100% |
| B0 |
【注意事项】
1）室温低于20℃或试剂及标本未回到室温（20- 25℃）会导致数值偏低。
2）在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。
3）标准物质和显色液对光敏感，避免直接暴露在光线下。
4）混合要均匀，洗板要彻底（包括加样品和标准液的时候都必需充分混合均匀）。
5）反应停止液为强酸性物质，避免接触皮肤。
6）不要使用过了有效期的试剂盒，也不要稀释或搀杂使用不同生产厂家的试剂盒这样会引起灵敏度降低。
试剂盒的储存条件是2-8℃，切勿冷冻。
武汉阳达生物科技有限公司
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