Optimized Trypsin

价格： ￥180

品牌：细工生物

货号：cat:cc17.3

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供应商：细工生物

运输方式：-20

Optimized Trypsin
with EDTA,without Ca2+ Mg2+
cat:cc17.3 mfd:201902
size:100ml storage:-20
推荐：保种体系试剂
特点：
保种试剂系列，适合较难养类细胞，消化时间稍长，为工业细胞工厂用户开发，后续细胞状态会更好。同株细胞消化时间固定，室温即开即用。无消化过度因素影响。工业应用，容错率提高20%
图片中为293T,无吹打、机械动作分散细胞，图片中是消化3分钟左右，全部是化学作用将成团细胞分散成单个细胞，彩图为293T共聚焦96小时（增强贴壁试剂辅助，国产玻片），稍后用户可查询文献。看我用户图片（一直保密，用户肯定比我共聚焦还要漂亮）共聚焦国产玻片处理后才可以，进口大牌子玻片不用处理(做细胞爬片很多实验室失误在这），关于共聚焦其他细节老师可来信沟通。
推荐细胞：乳腺癌类，卵巢癌类，原代、干细胞、293T、易成片团聚细胞（成片团聚也跟很多因素有关，具体问题具体分析）欢迎各位老师来信沟通，我司对细节及步骤问题常年统计。
原装进口500ML大包装胰酶注意事项，很多老师评价大包装不好用，稀释液一定要用对，购前要跟厂家问清楚拿那种稀释，不一样的稀释液会使胰酶PH有变化，影响细胞实验。
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对消化要求较高案例细胞介绍（胰导β细胞、胰腺类细胞消化推荐、B lymphocyte cell 、胰腺原代）建议与讨论，国内实验室养的都不是很顺利。
如后面是长期课题，就上述提几个建议，要是国内库购买，建议按以下给出试剂都可尝试，目的是看看能否将生长慢问题解决。建议先看看能否找到问题关键点。先上手后，总结下这只细胞特点（培养过程中问题我们可讨论），若能解决问题，在后面考虑从ATCC购买或者原代提取，目前觉得消化步骤较重要，我列下试剂，后面您参考用。

消化部分推荐-若有老师有相关经验与技巧，能否列出产品，并告知理由。
Trypsin--建议不用或者低浓度加其他消化试剂结合试试。胰酶对细胞损伤估计很大，这点我们觉得较关键，建议结合列出两个消化混合使用较稳妥，推荐浓度0.05（我们这款表现更优）
理由： the most common being incomplete solubility, lot-to-lot variability, cell toxicity, and cell surface protein/receptor damage.最常见的是不完全溶解、多点变异、细胞毒性和细胞表面蛋白/受体损伤。
Elastase 弹性蛋白酶在胰腺中产生，相对柔和一些。文献常用方案是原代细胞消化：胰酶+胶原酶+弹性蛋白酶
DNaseⅠ由外分泌腺分泌，在胰腺和腮腺中最为丰富。常用是易成团细胞，建议这个试剂先消化。
后面这两个推荐理由是，胰腺类细胞也很难养，β细胞来源胰腺，所以列出。

--B lymphocyte cell 案例细胞成份比较
案例细胞Rat Pancreas 大鼠胰腺（INS-1细胞)来源成份参考（Hygromycin B --Blasticidin S HCl--Zeocin Selection Reagent ）

ATCC-NAMALWA (ATCC CRL-1432）这个是人来源的β细胞，完全培养基作参考，RPMI 1640 medium with 2 mM L-glutamine adjusted to contain 1.5 g/L sodium bicarbonate, 4.5 g/L glucose, 10 mM HEPES, and 1.0 mM sodium pyruvate, 92.5%; fetal bovine serum, 7.5%

推荐无血清方案 CC-3211（ B lymphocyte Medium），Recombinant Human Granulocytemacrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) to the 100 ml aliquot of LGM-3™ Medium for a final GM-CSF concentration of 800 U/ml. Transfer 80,000 units of Recombinant Human Interleukin 4 (IL-4) to the 100 ml aliquot of LGM3™ Medium for a final IL-4 concentration of 800 U/ml. Stir until all cytokines are dissolved.

转染前调整细胞状态推荐，消化与促贴壁结合使用，一样培养条件，曾强贴壁试剂增强时间为二十分钟，有相关需求老师可列出目的需求。

普通试剂研发历程：
胰酶统计了六年，推出我们的Optimized Trypsin（下面有产品链接），对胰酶挑剔的细胞有易成团的神经胶质类、肝类、乳腺癌类、胰岛胰腺类、免疫悬浮（这个成团也可通过离心后，加入低浓度胰酶解决团聚）团聚问题不解决，冻存后的细胞团DMSO深入不充分，容易有冰晶形成损伤细胞，导致复苏后状态不理想，成团成片细胞培养过程中中间细胞得不到完全培养基营养吸收。通过反复多家实验室验证，这点可用我们推荐胰酶，常温消化，完全利用化学作用，无机械力消化成单个细胞，俺我们方法与0.25浓度胰酶消化后，吹打散细胞方法冻存后复苏比较细胞成活率，这个成活率高低，也是转染率高低理由。此产品推出后，经用户使用后统计总结目前结论：胰岛胰腺类细胞没有惯例问题，新手培养2020到2021培养胰岛胰腺类细胞系，没碰到BUG，今年准备完成国内库保钟难细胞系：beas-2b HK-2 INS-1 THLE-3，胰酶算是一个基础条件，有准备养这类细胞老师，可来信标明，相关资料可讨论

20211101原料影响因素涨价，老用户价格不变。巨噬类成片特性解决想当出色。
各部位组织器官巨噬开始统计-培养基选择讨论，建系可行性讨论：1；类上皮与组织上皮如何区分-肠道分布。2：骨髓中DC与巨噬如何区分。3：神经胶质与巨噬如何区分。神经类研究老师能否给些胶质与巨噬区别，我们有些胶质细胞系培养统计数据，培养中成片特新有相关一致特点。4：心内：尘细胞，心力衰竭细胞与巨噬的共性。5：疑问：骨髓来源巨噬：如何避免成纤维类淹没巨噬6：增殖与不增殖：大部分观点是不增殖，这类大部分是文献派。细工不同观点：目前培养技术方法试剂等有很大改善-与较早文献比较。对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞；RAW 264.7焦熟悉也统计了多年，国内库用这个细胞验证血清内毒素很准（我们统计大概有十年之久，碰到有特点的血清，这个细胞验证很准，包括现在国外大牌子的血清，普通用户不是很关注，这类细胞一上便知结果。以下列出细胞例如武汉库，昆明库，已有不少建立成功的巨噬类细胞系。各种问题来信都可讨论。

20220121：产品统计结果，最核心是细胞膜无损伤，传代后直接生长，没有膜损伤后恢复期，所以细胞状态会更优，是我们产品特点。
常规量：疫苗生产用细胞工厂、类器官、溶瘤。
超大量：多层板生物反应器、碟片式生物反应器、固定床生物反应器培养消化中，细胞消化时间较长，传统方式不适合，细胞消化前后细胞质量不一致，前面损伤大，后面还没裂解细胞，导致细胞整体质量均一行差，死细胞碎片较多，影响后期目的实验，我们在国内正规库建系原代测试，消化几个小时也没问题，消化形成单个传代后，正常增值生长。超大量培养关于浓缩培养基相关，可关注我们后期推出的维持培养基开发，血清替代（核心全部用国内生产技术，评测标准按进口品牌平行测试为设计标准。结合维持培养基优势，重组蛋白生产相关纯化后期收获蛋白前可换成血清替代品，从细胞质量状态，后期纯化蛋白量，优势很大。北京院校有超大量细胞培养要求用户（实验室空间实现生产中试细胞量相当容易，例如一个固定床生物反应器一个占地几平米的面积，相当几百个10层细胞工厂，我们可配合完成交钥匙前全部评测）

20220207
适用实验
细胞表面标志物分析、病毒生长检测、血清饥饿诱导的休眠检测、通过致癌基因转染的转化分析、神经嵴细胞迁移分析、细胞增殖、细胞趋触性分析、肿瘤细胞迁移分析、常规细胞传代、生产规模扩大（生物反应器）和流式细胞分析使用、自动化培养中消化需容错率较高需求用户（消化与损伤容错率高）

细工该产品在以下细胞应用中，有空泡越来越厉害问题，可用该产品培养一段时间看下效果：成纤维细胞、角质化细胞、血管内皮细胞、肝细胞、血管平滑肌细胞、肝细胞祖细胞、原代鸡胚神经细胞、骨髓干细胞、胰岛胰腺类原代，细胞系、贴壁 CHO 和 BHK 细胞、巨噬细胞、293 细胞、L929 细胞、永生化小鼠睾丸生殖细胞、3T3、Vero、COS、HeLa、NT2、MG63、M24 和 A375 转移性黑色素瘤、神经胶质瘤 U251 和 D54、HT1080 纤维肉瘤细胞和 Sf9 昆虫细胞、人胰腺癌细胞；PANC-1：人胚胎胰腺组织来源细胞；CCC-HPE-2：人胰腺腺泡上皮癌；HPAC：人胰腺癌细胞；AsPC-1：人胰腺导管癌细胞；CFPAC-1：人原位胰腺腺癌细胞；BxPC-3：人胰腺癌细胞；HS 766T：人胰腺癌细胞系；SW 1990：人胰腺导管癌细胞（淋巴结转移）；T3M-4：小鼠胰腺癌细胞（B类）；Pan02：tTA基因修饰的小鼠胰腺癌细胞（B类）；Pan02-CAG-tTA-2D1：tTA基因修饰的小鼠胰腺癌细胞（B类）；Pan02-CAG-tTA-3E6：tTA基因修饰的小鼠胰腺癌细胞（B类）；Pan02-CAG-tTA-4B3：tTA基因修饰的小鼠胰腺癌细胞（B类）；Pan02-CAG-tTA-4C5：大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞；AR42J：人胰腺癌细胞HPAF-II：人胰腺癌细胞PANC-1：人胰腺癌细胞MIA PaCa-2：人原位胰腺腺癌细胞BxPC-3：人胰腺癌细胞CFPAC-1：人胰腺癌细胞系SW 1990：人转移胰腺腺癌细胞AsPC-1：人胰腺癌细胞PANC-1：人胰腺癌细胞系；SW 1990：人胰腺导管腺癌细胞；CFPAC-1：人胰腺癌细胞；MIA PaCa-2：人胰腺癌细胞；PANC-1：人胰腺细胞系；HPC-Y5：人源胰腺癌细胞；PAXC-003：人源胰腺癌细胞；PAXC-002：人源胰腺癌细胞；PAXC-010：大鼠胰腺导管干细胞；XMRPDSC2012：中国人胰腺癌原位癌细胞系；HPPS-1：人胰腺癌神经浸润细胞系；HPNI-1：中国人胰腺癌原位癌细胞系；STL-C1：人胰腺癌神经浸润细胞系；STL-C2：人胰腺癌细胞系；BxPC-3 M8：人胰腺癌细胞；CFPAC-1：人胰腺癌细胞；PANC-1：：大鼠胰岛细胞瘤细胞；INS-1：大鼠胰岛β细胞瘤细胞；RIN-m5F：小鼠胰岛内皮细胞MS1：小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞Beta-TC-6：小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞Beta-TC-6：大鼠胰岛干细胞；ALLRPISC2012：大鼠胰岛β细胞瘤细胞；RIN-m5F：人胰岛融合细胞； 1.1B4

该产品已列入保种试剂级别，建议操作步骤按我司说明书，实验后不理想用户，如需参考建议，麻烦列出培养试剂耗材厂家货号，问题详细描述，预期目标。
产品评测统计过程中遇到细胞培养高手较多，与常规胰酶使用方法不同处是我们该品不怕消化过，建议高手先静心，从容操作。

20221108 流式原代筛选参考-保种胰酶消化应用
保种理念：平时要拿难养的细胞，先应用，拿到预期所需目的指标，或者实验结果不理想，提高细胞质量的需求。
推广应用很慢，但是使用过的用户，了解其中缘由的行家都很认可。
给新用户一些用户使用后的技巧分享，细胞培养量超多的量很大的，我们产品优势就来了，保守的说，一次处理十盘以上应该没问题，熟练用户应该几十盘同时处理也不成问题。

流式原代筛选参考-保种胰酶消化应用
流式设备
MoFlo XDP超速流式细胞分选系统
MoFlo Astrios EQ超高速流式分选系统
该设备实验室（协和、北医、清华、北大、脑科学、厦大、南大、浙大）
相关培训资料，巨噬细胞研究分析，原代的应用

讨论-胰酶消化，修复相关因子，方法统计中
细胞筛选中，组织前处理可讨论，问题描述要清晰（描述关键词：离体时间，消化成份，理由）
流式筛选后，培养救助，细胞膜恢复与救助理由参考（经验来自统计：转染后损伤、耐药后损伤、电转后损伤、难养救助经验）结合各类细胞本身特性特点。
描述关键词：离体时间，消化成份，理由？
救助：成分，是否有相关案例应用与经验储备。理由？
问题描述，预期要求。

20230615:
难点：易团聚、成片、冻存复苏活率不高、转染效果差、提升细胞质量、细胞救助、后续实验类器官、依托细胞大量培养后蛋白生产。建系目的等

相关产品及开发思路
培养中解离、胰酶优化解离、无酶解离、EDTA解离、难培养肝、胰岛胰腺对胰酶敏感细胞、上皮、等

大面积培养（单层培养，多层培养），大液体培养，细胞工厂，减少消化损伤，提高后面相关试验可行性，特高蛋白产量，超量维持培养。

20240415:建系应用优势，胰岛胰腺原代分离中，细胞与胰泡部分分离，与组织物分离中，组织体内生理特性（主要是离体入皿后，适应中，通路的开关在首代培养中极为重要）胰酶要点是既要充分分离细胞，还要避免细胞膜避免损伤，都要靠适合的胰酶浓度把握，细工做了大量相关细胞系等对胰酶敏感细胞系浓度筛选，开发出容错冗余非常有优势的Optimized Trypsin,工程应用建系应用用户可申请试用比较，邮件联系