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文献和实验
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保存条件 :-20
保质期 :一年
库存 :100
供应商 :上海雅吉
规格 :50T
产品名称:犬瘟热病毒实时荧光定量PCR试剂盒我公司提供各指标PCR试剂盒,Elisa试剂盒和胶体金试纸条,还可以定制PCR试剂盒,欢迎新老客户来电咨询报价索取说明书。
【包装规格】 50T/盒
【预期用途】
本试剂盒利用实时荧光PCR原理,定性检测,对引起的疾病诊断及疗效评估有重要指导意义。
【检验原理】
本试剂盒针对的高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。
【主要组成成份】
序号 | 组成 | 25T/盒 | 50T/盒 |
1 | RT-PCR反应液 | 375 μL×1管 | 750 μL×1管 |
2 | 逆转录酶 | 50 μL×1管 | 100 μL×1管 |
3 | Taq酶 | 75 μL×1管 | 150 μL×1管 |
4 | 阳性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
5 | 阴性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
6 | 说明书 | 1份 | 1份 |
注:阴性对照为偶蹄兽类基因组DNA,阳性对照为失去活性的cDNA。
犬瘟热病毒实时荧光定量PCR试剂盒部分产品图片如下:
【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。
【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1. 适用标本类型:发病动物血液、空肠及小肠肠内容物及组织脏器(肠道组织、肠系膜及淋巴结等)和病毒培养液。
2. 标本采集,方法如下:
(1) 血清:用一次性注射器取静脉血2-3ml,转至5ml 的干燥管中,密闭送检。
(2) 肠内容物:无菌条件下取肠道内容物约1g 左右,置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理盐水)的5ml 离心管中,立即送检。
(3) 组织脏器:取发病动物肠道组织及肠系膜淋巴结等组织约1g,置一1.5ml的洁净离心管中,密闭送检。
3.应避免标本间交叉污染。
4.标本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于2~8℃冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-80℃以下,避免反复冻融。
犬瘟热病毒实时荧光定量PCR试剂盒检验方法:
1.试剂准备(试剂准备区)
(1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。
(2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数(1T)+阳性对照数(1T)+误差预留量(1T)+样本数
单反液配制表(每份) | RT-PCR反应液 | 15.0 μL |
逆转录酶 | 2.0 μL | |
Taq酶 | 3.0 μL |
(3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。
2.样本准备(样本处理区)
用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品,终体积为25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。
4. PCR(PCR扩增区)
(1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。
(2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。
反应体积 | 25 μL | 通道选择 | FAM通道采集荧光信号 |
PCR 反应 条件 |
步骤 | 条件 | 循环数 |
反转录 | 42℃:10分钟(min) | 1 | |
预变性 | 95℃:3分钟(min) | 1 | |
预扩增 | 95℃:5秒(s) | 5 | |
55℃:40秒(s) | |||
PCR扩增 | 95℃:5秒(s) |
上海雅吉生物科技有限公司
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联系人:王源
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