产品详情
文献和实验
相关推荐
库存 :197
英文名 :BalbScript 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix
保质期 :一周
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
保存条件 :少于一周的时间。如想延长
规格 :50次|100次
特别提示:包括第一链cDNA合成试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:第一链cDNA合成试剂盒
英文名称:BalbScript 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix
产品货号:JN0002
产品规格:50次|100次
本试剂盒是以mRNA或者总RNA为模板,高效合成第一链cDNA。本试剂盒使用M-MuLV反转录酶(JN0011),它的RNA酶H的活性与AMV反转录酶相比较低。该反转录酶可耐受42-50℃温度.试剂盒中含有重组RNA酶抑制剂(E055),可耐受55℃高温,有效防止RNA降解。试剂盒同时含有Oligo(dT)18,只以有poly(A)尾巴的mRNA为模板合成cDNA,使用本试剂盒也可采用序列特异性引物。合成的第一链cDNA能直接用作PCR或荧光定量PCR的模板,第二链cDNA的合成或线性RNA扩增,也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验。
试剂盒组成:
组份 | JN0002-20次 | JN0002-100次 |
M-MuLV反转录酶(200 U/μl) | 25μl | 120 μl |
RNA酶抑制剂(40 U/μl) | 25 μl | 120 μl |
5xM-MuLV Buffer | 150 μl | 500 μl |
dNTP(10mM) | 50 μl | 250 μl |
Oligo(dT)18(100 μM) | 25 μl | 120 μl |
GAPDH正向引物(10 uM) | 20 μl | 20 μl |
GAPDH反向引物(10 uM) | 20 μl | 20 μl |
Water,nuclease-free | 2x1.25 ml | 2x1.25 ml |
注:2×RT-PCR Reaction Buffer中包含Taq DNA聚合酶、dNTP、Mg2+、RNase Inhibitor以及反应缓冲液。
注意事项:
1、用DEPC处理实验用到的所有管子和枪头,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,整个实验过程戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。
2、确保所用试剂及超纯水中无RNA酶污染。
3、纯化过的RNA要保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯酚,因为以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。
实验步骤:
I.第一链cDNA合成
1、融化后,将试剂盒中各组分混匀并稍微离心,离心后置于冰上。
2、按顺序加入下表中的反应物。
3、可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构,可先将模板和引物的混合液轻轻混匀,短暂离心,65℃孵育5分钟,冰上冷却,离心,再置于冰上冷却。
4、轻轻混匀,离心。
5、如果使用Oligo(dT)18或者基因特异型引物,42℃孵育60分钟。如果使用随机六聚体引物,25℃.先孵育5分钟,随后42℃孵育60分钟。
6、70℃加热5 min终止反应。
反应产物可直接用于PCR反应或者在-20℃保存少于一周的时间。如想延长保存时间,建议使用-70℃保存。
II.第一链cDNA的PCR扩增
合成的第一链cDNA可直接用于PCR或qPCR。第一链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50 μl的PCR反应体系中,第一链cDNA反应液加入2μl。
应用实例:
图例一)小鼠胚胎肝脏总RNA抽提。
按百奥莱博RNA抽提试剂盒操作说明书抽提,起始组织量50mg;
图例二)百奥莱博第一链cDNA合成后PCR扩增目的基因。
泳道1:某进口品牌;泳道2:百奥莱博第一链cDNA合成试剂盒扩增结果。(1ug总RNA反转录后,取1ul用于PCR检测,目的基因:GAPDH)
常用反应体系(20μl)
模板RNA | 总RNA(0.1 ng~5 μg) poly(A) mRNA(10 pg~0.5 μg) 特异性RNA(0.01 pg~0.5 μg) |
引物 | Oligo (dT)18引物1μl 随机六聚体引物1 μl 基因特异性引物15~20 pmol |
5×Reaction Buffer | 4ul |
RNA酶抑制剂(20U/ul) | 1ul |
dNTP(各10mM) | 2.0μl |
M-MuLV反转录酶(200U/ul) | 1μl |
ddH2O(Nuclease Free) | 至20μl |
我公司销售的第一链cDNA合成试剂盒质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
北京百奥莱博科技有限公司
实名认证
钻石会员
入驻年限:9年