miRNA,siRNA高通量筛选服务价格

提供商：北京唯尚立德生物科技有限公司

服务名称：miRNA,siRNA高通量筛选服务

高通量筛选服务由上海吉诺瑞公司推出，本公司全面代理吉诺瑞公司的全部服务项目

1. 背景介绍
RNAi技术是一种新型的基因沉默工具，可简单、快速、特异地分析特定基因的细胞功能。其工作原理如下：在内源蛋白复合物（RISC）的作用下，双链RNA 分子可以通过碱基互补配对原则而降解目标靶基因的信使RNA（mRNA），从而达到沉默靶基因表达水平的目的。在全基因范围，筛选与确认特定细胞行为的功能基因已成为药物化学、生命科学研究已经应用的常规手段。基于SiRNA全基因组文库的高通量筛选技术，可平行分析成千上万条基因的功能，大大加快研究进程，从而能迅速、全面地鉴定出细胞过程或信号传导途径的相关候选基因，以及疾病相关的药物靶基因，保证研究成果更为系统、新颖。

2. 常规孔板筛选办法

常规的siRNA筛选是基于384 或96微孔板，采用一般转染siRNA的方法或者反式转染方法将siRNA导入细胞进行高通量的细胞功能筛选。其中反式转染法由于操作方便，时间较短，常被高通量筛选采用。简单讲，预先将siRNA文库里各条siRNA分别与转染试剂混合，转移到384微孔板中，然后将培养好的细胞接种到微孔板里，细胞被转染siRNA。经过48-72小时的培养，蛋白表达水平沉默后，通过高通量的微孔板读数仪或高通量的扫描显微镜读出孔板里的细胞信号。若这些细胞信号与参照细胞相比发生了变化，则认为相应的siRNA与研究的细胞过程相关，从而鉴定出相关的候选基因。

微孔板筛选虽然简单明了，使用方便，适合于100-500个基因范围的筛选。但是当筛选库容量增大时，孔板筛选的成本将大大提高。比如，全基因组2万个基因，若重复三次筛选，需做6万次转染、分析，因此使用的siRNA、转染试剂、以及后续检测用的抗体和底物需要量特别大。

3. 芯片筛选技术

除了传统的孔板筛选服务外，吉诺瑞针对大规模筛选需求，成功开发出先进的SAMcell（Self-Assemble Microcell）细胞芯片技术，在玻璃盖玻片上，细胞自组装形成细胞岛点阵，极大地提高了筛选通量。同时采用反向转染技术，简化了筛选过程，同时大大减少筛选中使用的SiRNA和相应试剂的用量。

技术特点：

1. 筛选通量极大提高。
2. 操作简单，只需要像传统的细胞培养操作一样加入细胞，细胞自组装自转染，使得大规模筛选十分方便。
3. 实验平行性好, 稳定性提高100倍，所有细胞小岛在同样的培养环境，避免384孔板间实验条件差别。
4. 成本是现有筛选技术的十分之一, SiRNA、转染试剂及检测抗体用量都大大降低。

SAM cell技术已经大量应用于SiRNA基因文库及化合物库高通量筛选。

5. 目前吉诺瑞提供如下规模文库筛选
1) 全基因组 siRNA文库（约21585genes）
2) 人类全miRNA文库及inhibitor（904条）
3) 细胞周期调节 siRNA 文库（131 genes）
4) 去泛素化酶 siRNA文库（127 genes）
5) 磷酸化酶文库（257 genes）
6) 细胞因子受体siRNA文库（319 genes）
7) G蛋白偶联受体siRNA文库 (516 genes)
8) 细胞凋亡 siRNA 文库(558 genes)
9) 蛋白激酶siRNA文库（779 genes）
10) 定制siRNA文库（50－2000 genes ）

* 多种规模的siRNA文库均可使用，根据实验需要和承担能力，灵活进行筛选。
* 根据筛选的分析方法要求，选用SAM cell技术或常规384孔板进行筛选

6. 服务流程

1) 与我们联提出筛选意向（见吉诺瑞高通量筛选申请表格）。
2) 公司资深研究员和您深入讨论，根据我们筛选经验，确定筛选方案。
3) 优化筛选条件。
4) 小规模试筛，确保筛选条件的可行和稳定。
5) 大规模siRNA文库筛选。
6) 摘樱桃阳性结果的验证（免费验证筛选文库的5%，最多50个基因/assay）。
7) 实验数据的整理和分析。最后提交筛选报告。
整个筛选周期大约为三个月，主要取决于筛选文库大小，筛选方法优化时间