m6A RNA甲基化测序-欧易生物

提供商 ：上海欧易生物医学科技有限公司

服务名称 ： m6A RNA甲基化测序

  

 

在真核生物中，已知RNA存在超过100种修饰方式，包括m6A，m1A，m6Am等。m6A（N6-methyladenosine，6-甲基腺嘌呤）是真核生物mRNA最常见的一种转录后修饰，占到RNA甲基化修饰的80%。已知绝大多数真核生物中，mRNA在5‘ Cap处存在的甲基化修饰，作用包括维持mRNA稳定性、mRNA前体剪切、多腺苷酸化、mRNA运输与翻译起始等；而3‘ polyA发生的甲基化修饰有助于出核转运、翻译起始以及与polyA结合蛋白一起维持mRNA的结构稳定。

目前，在全转录组范围检测m6A修饰的主流技术是MeRIP-seq（m6A-seq），该技术使用N6-甲基腺嘌呤抗体富集甲基化的RNA片段，然后结合高通量测序，在全转录组范围内检测m6A修饰。

 

 

  

 

 

产品特色

 

完善的服务项目

十余年样品处理经验沉淀，客户只需提供样本，后续全部流程由欧易完成

 

标准的实验流程

采用国际主流抗体品牌，并进行严格质检和效价分析，提高IP效率和特异性

 

稳定的数据质量

采用Illumina原装试剂盒，提高数据稳定性和比对率

 

个性化分析内容

专业的生物信息团队，量身定制个性化分析，对数据进行全面挖掘

 

 

 

 

 

  

 

 

 

常见问题

 

1. m6A-seq 对样品有什么要求？

1）RNA 样品：请提供 50ug total RNA； 推荐 RIN > 7；细胞样品要求细胞数 > 2 * 108；组织样品要求不低于 5g 组织。

2）样品间差异性状需与 m6A 相关，否则可能无法获取期望结果。

3）样本请置于 1.5ml Eppendorf 管中， 封膜干冰运输；

细胞/组织样本可用 TRIZOL 或 RNA 保护剂处理， 液氮冻存后-80℃保存；

RNA 样本可溶于 RNAse-free 超纯水中， -80℃避免反复冻融。

 

2. Input和IP样本之间的关系是什么？

Input 和 IP 属于两个样本，在前期检测、建库、测序都是平行进行的，但是分析中需要将两个样本的测序数据进行整合分析，得出最终的 peak 结果，并进行后续分析。

 

3. Input 样本是什么？有什么作用？

我们将 RNA 片段化后，在进行免疫沉淀前，需要取一部分 RNA 做 Input 对照（不进行免疫沉淀过程）。在后续数据分析，可以通过 Input 对照排除背景噪音（排除因本底表达水平高或一些非特异性结合所造成的假阳性 peaks），验证m6A 富集的效果和整个实验中 IP 效果，所以 Input 对照是 IP-seq 实验必不可少的步骤。

 

4. m6A-seq 有哪些研究方向？

1）首先是 m6A 本身的修饰过程涉及的甲基化酶和去甲基化酶，以及 m6A 识别蛋白的功能，进而研究 m6A 修饰的生物学功能和作用机制；
2）其次是 m6A 修饰图谱构建及作用机制，特别是构建疾病细胞模型或者发病组织的 m6A修饰谱；
3）联合 RNA-seq 研究 m6A 甲基化与基因表达的关系。