蛋白表达纯化服务

蛋白表达纯化服务

(一) 基因设计及合成 
 

纽赫生物为客户提供密码子、GC含量和特殊基因序列的优化等基因设计工作，能提高转录和翻译效率，提高mRNA稳定性。
 

(二) 载体构建
 

纽赫生物有如pET21a（+），pET28a(+)、pGEX系列、pMAL系列等三十多种成熟原核表达载体、真核表达载体可供选择，有十多种自主优化构建的特色载体，这些载体分别具有提高表达量、促进分泌表达、促进可溶表达、促进二硫键形成等特征。并可针对目的蛋白性质、制备工艺要求以及大肠杆菌系统的特点，优化基因序列和载体构建，以求得到最优的表达系统等。在构建表达载体时主要通过以下几方面进行优化：

1）启动子的选择：提供强启动子、中强启动子及弱启动子的选择；
2）信号肽的选择：提供多种不同分泌机制的信号肽供选择，找到最优的表达信号肽；
3）促表达伴侣分子的选择：有多种促可溶表达分子伴侣、促二硫键形成分子伴侣、促折叠分子伴侣可供选择；
4）纯化标签的选择：为方便纯化制备，提供多种亲和纯化标签供选择，如His标签、GST标签、MBP标签、Strep标签等。
 

(三) 表达菌株建立及小量诱导表达
 

纽赫生物主要从增强质粒稳定性、提高表达量、促进含稀有密码子基因的表达、提供胞内蛋白二硫键形成环境、促进毒性蛋白表达等方面进行表达菌株的选择，并进行小量诱导表达和检测。
 

(四) 重组蛋白大规模表达工艺优化
 

纽赫生物可以为客户提供3L、10L、50L等不同量级的蛋白发酵工艺的优化，主要从培养方式、培养基配制、培养液pH、培养温度、培养时间等多个角度入手，对重组蛋白的大规模表达工艺进行优化。
 

(五) 蛋白复性
 

纽赫生物综合现有各类复性方法，优化出若干类针对不同重组蛋白的方法，分别复性不同蛋白，达到使每种重组蛋白都获得较高复性效率的目的。这些优化的方面包括：

a）缓冲体系的选择，包括缓冲盐的种类和浓度、pH值等；
b）盐离子种类和强度的选择；
c）氧化还原对的选择，这个需要参考重组蛋白的二硫键含量情况；
d）聚集抑制剂和复性促进剂的选择。有多种化学试剂可以用来抑制蛋白聚集和促进复性，复性重组蛋白时可以针对性选用。
 

(六) 蛋白纯化
 

纽赫生物建有完善的具备成熟的离子层析介质、亲和层析介质制备经验和产品，可以进行多样化的蛋白纯化方法选择和优化。纽赫生物根据客户需求，可为客户制备出纯度达到90%-99%重组蛋白。 

(七) 内毒素控制与去除
 

系统表达的蛋白产品会夹带大量内毒素残留，其主要来源为大肠杆菌细胞壁成分脂多糖。内毒素因为其本身异质性，分子大小不一、疏水性很强、带很强负电荷，往往与目的蛋白结合在一起，极不易分开，所以去除起来很困难，迄今并无很好的方法。纽赫生物通过全流程控制和针对性去除相结合的方法控制残留水平，最终将产品内毒素水平控制在小于1EU/μg甚至小于0.1EU/μg。
 

(八) 蛋白鉴定
 

纽赫生物熟练掌握SDS-PAGE、蛋白浓度检测、western blot、流式细胞术等定性或者定量分析的方法进行重组蛋白鉴定。

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