文献支持丙二醛(MDA)含量检测试剂盒 可见分光光度法

保存条件 ：2-8℃

保质期 ：6个月

英文名 ：MDA

库存 ：99

供应商 ：北京索莱宝科技有限公司

CAS号 ：BC0020-50T/48S

规格 ：50管/48样

丙二醛（MDA）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0020
规格：50T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体60 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂一	液体42 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×2瓶	2-8℃保存
试剂三	液体12 mL×1瓶	2-8℃保存

溶液的配制：
MDA检测工作液的配制：临用前取1瓶试剂二加入20 mL试剂一，溶解混匀，2-8℃保存一个月。MDA检测工作液较难溶解，可以70℃加热，并剧烈振荡以促进溶解，或者通过超声处理以促进溶解。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌、细胞样本的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织样本的制备：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）：直接检测。
4、高脂血或者油脂类样本：取40μL样本和80μL无水乙醇混合（即样本被稀释3倍），涡旋震荡5min后使用。不同高脂肪类样本可能会有不同的稀释倍数，可以稀释不同倍数进行预实验以确定最佳稀释倍数。同时操作表中空白管的蒸馏水应以（66μL蒸馏水+134μL乙醇）代替。
二、测定步骤
 

1. 分光光度计预热30min以上，蒸馏水调零。
2. 按下表步骤加样：

试剂名称（μL）	测定管	空白管
MDA检测工作液	600	600
蒸馏水	-	200
样本	200	-
试剂三	200	200

混合液在100℃水浴中保温60min后（盖紧缠膜，防止爆盖），置于冰浴中冷却，10000g，常温，离心10min。取上清至1mL玻璃比色皿中，测定各样本在532nm和600nm处的吸光度，分别计算，ΔA532=A532_测定-A532_空白，ΔA600=A600_测定-A600_空白，ΔA=ΔA532-ΔA600（空白管只需做1-2次）。
注意高脂血或者油脂类样本在操作表中空白管的蒸馏水应以（33μL蒸馏水+67μL乙醇）代替
三、MDA含量计算
（1）按照蛋白浓度计算
MDA含量（nmol/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V样本) ×F =32.258×ΔA÷Cpr×F
（2）按照样本质量计算
MDA含量（nmol/g 质量）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W×V样本÷V提取) ×F = 32.258×ΔA÷W×F
（3）按照细菌或细胞数量计算
MDA含量（nmol/10⁴ cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹] ÷(500×V样本÷V提取) ×F =0.0645×ΔA×F
（4）按照血清（浆）体积计算
MDA含量（nmol/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷V样本×F =32.258×ΔA×F
V反总：反应体系总体积，0.001L；ε: MDA摩尔吸光系数，1.55×10⁵ L/mol/cm；V样本：加入样本体积，0.2mL；d：比色皿光径，1cm；V提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol；F：稀释倍数，高脂血或者油脂类样本需乘以稀释倍数。
注意事项：
若发现检测样本吸光值过低，可以将沸水浴时间60min调整为90min或者更长，但同一实验中的MDA的检测都需要延长到同一时间以免引起误差。
实验实例：

1. 取羊血清按照测定步骤操作，测得并计算ΔA532=A532_测定-A532_空白=0.124-0.01=0.114，ΔA600=A600_测定-A600_空白=0.057-0.002=0.055，ΔA=ΔA532-ΔA600=0.059按体积计：

MDA含量（nmol/mL）= 32.258×ΔA×F =1.903nmol/mL。

1. 取500万hela细胞，加1mL提取液进行样本处理，离心取上清后按测定步骤操作，测定并计算ΔA532=A532_测定-A532_空白=0.152-0.01=0.141，ΔA600=A600_测定-A600_空白=0.008-0.004=0.004，ΔA=ΔA532-ΔA600=0.137按照细菌或细胞数量计算：

MDA含量（nmol/10⁴ cell）=0.0645×ΔA×F =0.0088nmol/10⁴ cell

1. 取0.1g 小鼠肝脏，加1mL提取液进行样本处理，离心取上清后按测定步骤操作，测定并计算ΔA532=A532_测定-A532_空白=0.212-0.01=0.202，ΔA600=A600_测定-A600_空白=0.046-0.002=0.044，ΔA=ΔA532-ΔA600=0.158按照样本质量计算：

MDA含量（nmol/g 质量）=  32.258×ΔA÷W×F =50.968nmol/g 质量
相关发表文献：

1. Guoyue Liu, Hong Mei, Miao Chen, et al. Protective effect of agmatine against hyperoxia-induced acute lung injury via regulating lncRNA gadd7. Biochemical and Biophysical Research Communications. August 2019; 516(1):68-74. (IF2.705)
2. Wenzhen An,Ying Zhang,Xuan Zhang，et al. Ocular toxicity of reduced graphene oxide or graphene oxide exposure in mouse eyes. Experimental Eye Research. September 2018; (IF2.998)
3. Siyang Yu, Bo Dong,Zhenfei Fang,et al. Knockdown of lncRNA AK139328 alleviates myocardial ischaemia/reperfusion injury in diabetic mice via modulating miR‐204‐4p and inhibiting autophagy. Journal of Cellular and Molecular Medicine. July 2018;(IF4.658)
4. Zhigang Chen , Qiaoling Yuan , Guangren Xu,et al. Effects of Quercetin on Proliferation and H2O2-Induced Apoptosis of Intestinal Porcine Enterocyte Cells. Molecules. 2018; (IF3.06)
5. Huiwen Xiao, Yuan Li, Dan Luo,et al. Hydrogen-water ameliorates radiation-induced gastrointestinal toxicity via MyD88’s effects on the gut microbiota. experimental and molecular medicine. January 2018;(IF4.743)
6. Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen,et al. Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development. Toxicological & Environmental Chemistry. Feb 2019;(IF3.547)
7. Zeyong Zhang,Huanhuan Liu,Ce Sun,etc. A C2H2 zinc-finger protein OsZFP213 interacts with OsMAPK3 to enhance salt tolerance in rice. Journal of Plant Physiology. October 2018;(IF2.825)
8. Ying Zhao,Wengang Yu,Xiangyu Hu,et al. Physiological and transcriptomic analysis revealed the involvement of crucial factors in heat stress response of Rhododendron hainanense. Gene. June 2018;(IF2.638)
9. Lijiao Gu, Hantao Wang, Hengling Wei,et al. Identification, Expression, and Functional Analysis of the Group IId WRKY Subfamily in Upland Cotton (Gossypium hirsutum L.). Frontier in Immunology. November 2018;(IF4.259)
10. Ping Shao,Pei Wang,Ben Niu,et al. Environmental stress stability of pectin-stabilized resveratrol liposomes with different degree of esterification. International Journal of Biological Macromolecules. November 2018;(IF4.784)

参考文献：
[1] Spitz D R , Oberley L W . An assay for superoxide dismutase activity in mammalian tissue homogenates[J]. Analytical Biochemistry,1989
[2] Masayasu M , Hiroshi Y . A simplified assay method of superoxide dismutase activity for clinical use[J]. Clinica Chimica Acta.
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