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文献和实验
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保存条件 :2-8℃
保质期 :6个月
英文名 :Peroxidase(POD) Activity Assay Kit
库存 :99
供应商 :北京索莱宝科技有限公司
CAS号 :BC0090-50T/48S
规格 :50管/48样
过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC0090
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体0.04 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
- 试剂二:液体置于试剂瓶内EP管中,使用前需先离心。取0.01 mL试剂二加入3.2mL试剂一混合备用(约24T),现配现用,也可根据样本量按比例配制。
POD(EC 1.11.1.7)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
- 细菌、细胞或组织样本的制备:
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
- 血清(浆)样本:直接检测。
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至470nm,蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二和三37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min。
3、样本测定表:
试剂名称(µL) | 测定管 |
样本 | 15 |
蒸馏水 | 270 |
试剂一 | 520 |
试剂二 | 130 |
试剂三 | 135 |
三、POD活性计算
- 血清(浆)POD活性
POD(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T =7133×ΔA
- 组织、细菌或细胞POD活性
- 按样本蛋白浓度计算
POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr
- 按样本质量计算
POD(U/g 质量)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W
- 按细菌或细胞数量计算
POD(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T =14.27×ΔA
V反总:反应体系总体积,1.07mL;V样:加入样本体积,0.015mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
注意事项:
- 若一次性测定样本较多,可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min以上,测定时加入15µL样本和1055µL混合液测定。
- 如果ΔA小于0.005,可将反应时间延长到5min。如果ΔA大于0.5或者反应液中有较多气泡产生,可将样本用提取液稀释后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。
取0.1043g大鼠心脏加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上,用提取液稀释2倍后按照测定步骤操作,用玻璃比色皿测定并计算ΔA=A2-A1=0.363-0.134=0.229。按样本质量计算含量得:
POD(U/g 质量)=7133×ΔA÷W×2(稀释倍数)=3.132×104 U/g 质量。
取0.1049g黄杨叶片,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上,按照测定步骤操作,用玻璃比色皿测定并计算ΔA=A2-A1=0.549-0.11=0.439。按样本质量计算含量得:
POD(U/g 质量)=7133×ΔA÷W=2.985×104 U/g 质量
相关发表文献:
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- Dou S, Liu S, Xu X, et al. Octanal inhibits spore germination of Penicillium digitatum involving membrane peroxidation[J]. Protoplasma, 2017, 254(4): 1539-1545.
- Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)[J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.
- Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019;162:364-373.(IF3.712)
- Yanjiao Yin,Chuanjiao Chen,Shiwei Guo,et al. The Fight Against Panax notoginseng Root-Rot Disease Using Zingiberaceae Essential Oils as Potential Weapons. Frontier in Immunology. October 2018;(IF4.716)
[1] Reuveni R. Peroxidase Activity as a Biochemical Marker for Resistance of Muskmelon (Cucumis melo) to Pseudoperonospora cubensis[J]. Phytopathology, 1992, 82(7).
[2] Doerge D R, Divi R L, Churchwell M I. Identification of the Colored Guaiacol Oxidation Product Produced by Peroxidases[J]. Analytical Biochemistry, 1997, 250(1):10-17.
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