Western blotting（人IgG）ECL化学发光法检测试剂盒

保存条件 ：-20

保质期 ：1年

英文名 ：ECL Western Blotting Detection Kit(Human IgG)

库存 ：999

供应商 ：北京索莱宝

规格 ：一盒

 Western blotting ECL 化学发光法检测试剂盒说明书
SW2010 Western blotting (小鼠 IgG) ECL 化学发光法显色试剂盒
SW2020 Western blotting (兔 IgG) ECL 化学发光法显色试剂盒
SW2030 Western blotting (山羊 IgG) ECL 化学发光法显色试剂盒
SW2040 Western blotting(小鼠/兔 IgG) ECL 化学发光法显色试剂盒
SW2050 Western blotting(人 IgG) ECL 化学发光法显色试剂盒

产品内容：
1. 封闭试剂：30g(可配制 600ml)。
2. 10 倍浓缩抗体稀释液，50ml。
3. HRP 标记二抗，0.1ml，效价 1：5000-10000。
4. ECL 显色液，25ml A+25ml B。

保存：-20℃避光密闭保存，一年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和 ECL 显色液存放于 2-8℃以方便使用。

产品简介：
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置）。
操作步骤：(仅供参考)

常规电泳转膜后:
1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min,以尽量洗去转印膜上的 SDS，防止影响后面的抗体结合。
2) 按 5g 封闭试剂加 100ml 双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭 30min。用 TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗 3 次每次 5min。
3) 将 10×抗体稀释液用双蒸水稀释成 1×（10ml 10×抗体稀释液加入 90ml 双蒸水，混匀，可 4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4) 用 1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或 37℃摇动孵育 2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5) 用 TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗 3 次每次 5min。
6) 用 1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按 10ml 抗体稀释液加入 1-2 ul HRP 标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育 1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7) 用 TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗 3 次每次 10min。
8) 根据用量，取 ECL 发光液 A、B 等量混匀，加在膜正面，暗室显色 1-5 分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色 30 秒到 1 分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中 1 分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间（从5 秒到 30 分钟）以期达到理想结果。

注意事项：
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。
2. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3. TBS-T（0.01M，PH7.6）配制方法：称取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的双蒸水溶解，用盐酸调 PH 到 7.6，再加入 0.5ml Tween－20，用双蒸水 加至 1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）

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