军团菌16S rRNA基因(386bp)常规PCR检测试剂盒规格

库存 ：47

英文名 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海一研

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：50T

注意事项：军团菌16S rRNA基因(386bp)常规PCR检测试剂盒规格建议加样顺序是阴性质控品、待检样本、阳性质控品。4. PCR扩增（扩增区）
1)      仪器设置（以ABI Prism 7500为例）
将PCR反应管放入PCR仪内，按照对应顺序设置阴性质控品(NTC)、阳性质控品(Standard)及待检样本(Unknown)。Reporter Dye为FAM，Quencher Dye为None，参比染料(Passive Reference)为 None。
2  ）    扩增程序
40Cycles
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集荧光信号，反应体系为25 μl。
军团菌16S rRNA基因(386bp)常规PCR检测试剂盒规格【结果分析条件设定】
u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
军团菌16S rRNA基因(386bp)常规PCR检测试剂盒规格【质控标准】
1.   阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；
2.   阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；
3.   以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。
军团菌16S rRNA基因(386bp)常规PCR检测试剂盒规格反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
军团菌16S rRNA基因(386bp)常规PCR检测试剂盒规格组成及试剂配制:
1、 酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

产品名称	规格	分类
军团菌16S rRNA基因(386bp)常规PCR检测试剂盒规格	50T	PCR检测试剂盒

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军团菌16S rRNA基因(386bp)常规PCR检测试剂盒规格【结果判断】
1.   阳性：有明显的指数扩增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明显的指数扩增期，且38≤Ct<40，此时样本为可疑样本；对于可疑样本建议复核一次，若复核结果Ct<40且有指数扩增期，则判定为阳性，否则判定为阴性；
3.   阴性：无指数扩增期，Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
军团菌16S rRNA基因(386bp)常规PCR检测试剂盒规格【对检验结果的解释】
1.   实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果；
2.   试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，可能会导致出现假阴性结果。【试剂盒使用注意事项】
1.   有关实验室管理规范请严格按照行业行政主管部门颁布的有关基因扩增检验实验室的管理规范执行。
2.   本试剂盒仅用于体外检测。
3.   实验请严格分区操作：
第一区：PCR前准备区 — 准备扩增所需试剂；
第二区：样本处理区 — 待测样本和对照品处理；
第三区：检测区 — PCR扩增检测。
4.   各区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染，实验后即请清洁工作台；
5.   试剂盒内各试剂使用前，充分融化后请稍事离心。
6.   在－20℃保存的样本裂解产物，应在加样前置室温解冻，作短暂离心后使用。
7.   分装有反应液的检测板或装入密实袋内再转移至样本区。
8.   加样时应使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快封上封板膜。
9.   扩增完毕立即取出检测板，密封在专用塑料袋内，丢弃于指定地点。
10.   反应液分装时应尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄露污染仪器。
11.   实验中用过的吸头请直接打入盛有1%次的废物缸内，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。
12.   工作台及各物品定期用1%次、75%酒精或紫外灯进行消毒。