供应商 ：上海埃泽思生物科技有限公司

规格 ：500ml

  人成纤维细胞无血清培养基
产品基本信息

产品名称	Applied Cell®人成纤维细胞无血清培养基
货    号	AC-1001015
规    格	500mL
运输保存条件	基础培养基2-8℃，添加剂-20--80℃
使用范围	人真皮/肺/心脏等多种组织器官来源成纤维细胞培养
保质期	12个月

产品简介

     人成纤维细胞无血清培养基是埃泽思生物科技有限公司（Applied Cell^®）自主研发的一款适用于人成纤维细胞培养的无动物源细胞培养产品。本产品应用人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源成纤维细胞原代分离、扩增与传代培养，且不含动物血清，内毒素水平低于药典标准（<0.06EU/mL）。本产品生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。

产品特性

• 无外源动物蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。
• 全程无血清生产，极大降低批次间差异。
• 可用于原代分离。
• 内毒素<0.06EU/ml，远低于中国药典水平。

组分	规格	数量	运输
人成纤维细胞基础培养基	450mL	1瓶	冰袋
人成纤维细胞添加剂	50mL	1瓶	干冰

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操作方法
人成纤维细胞培养基配制 1.2将添加剂以10%比例加入到人成纤维细胞基础培养基中，混匀，即为人成纤维细胞培养基（AC-1001015）。混合后培养基可在2-8℃ 稳定储存2-3周，不建议使用已配制超过3周的培养基。
1.3人成纤维细胞培养基可直接应用于人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源的成纤维细胞的原代分离、扩增与传代培养。
操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)
人成纤维细胞复苏(10cm dish)
2.1  从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的人成纤维细胞，迅速放入37℃水浴快速融解。
2.2 在生物安全柜或超净台中，将解冻后的细胞悬液缓慢加入5 mL预温的人成纤维细胞培养基（AC-1001015）。
2.3 1200rpm 离心3 min，吸掉上清，加入10ml人成纤维细胞培养基重悬细胞。
2.4 将细胞均匀铺到培养皿中，水平十字振动培养皿使细胞均匀分布，5% CO₂的37℃恒温细胞培养箱中培养24小时后观察细胞状态。
2.5 24h后更换新鲜人成纤维细胞培养基继续培养，每2-3天更换培养液。
人成纤维细胞传代培养
1. 在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到90%，即可传代。
2. 在超净台/安全柜中，吸掉原有培养基，加入PBS溶液清洗一次，加入细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底。
3. 室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
4. 加入消化液2倍体积的人成纤维细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。
5. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1200 rpm离心3 min。
6. 弃上清，加入人成纤维细胞培养基，重悬细胞，计数。1：2-1：4比例传代，或按2-5x10⁴ cells/cm²  传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于37℃，5%CO₂ 培养箱中培养。
注意：人成纤维增殖情况与细胞密度密切相关，所以传代时细胞密度不宜过稀。
人成纤维细胞冻存
1.  细胞达到90%汇合度， 吸掉原有培养基，PBS清洗一次。
2. 加入细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底，室温孵育4-5min或37℃孵育2-4min分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
3. 加入消化液2倍体积的人成纤维细胞培养基，用移液枪轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。
4.   将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min，吸掉上清。
5. 加入适量无血清细胞冻存液（治疗级）（AC-1001006），调整细胞冻存密度在1×10⁶ cells/mL左右，每支冻存管分装1.5-2ml。
6. 直接放入-80℃，24h后转入液氮中长期保存。
质量控制

检验项目 Test Catagories	参考数据 Reference Data	结果 The results
外观 Physical APPearance	橙红色液体 Orange-red liquid	符合规定 Conform to the provisions
澄清度 Clarity	澄清 Clear	符合规定 Conform to the provisions
pH值 Ph value	6.9-7.3	符合规定 Conform to the provisions
渗透压 Osmolality	270-340 （mosm/KgH2O）	符合规定 Conform to the provisions
细菌内毒素 Endotoxin	小于0.06 EU/ml	符合规定 Conform to the provisions
无菌 Sterility	无菌 Sterility	符合规定 Conform to the provisions
支原体 Mycoplasma	0.11um过滤，支原体试验为阴性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration	符合规定 Conform to the provisions