产品详情
文献和实验
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库存 :10000
英文名 :TUNEL KIT
CAS号 :无CAS号
保质期 :1年
供应商 :弗元生物
保存条件 :-20℃
规格 :20T
货号 | 产品名称 | 规格 | 目录价(元) | 促销价(元) |
FY600017-20T | TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC) | 20 TEST | 1560 | 1092 |
FY600017-50T | TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC) | 50 TEST | 2730 | 1911 |
产品简介:
细胞在发生凋亡时,细胞内激活的DNA内切酶会切断核小体间的基因组DNA,DNA会被降解成为约180 bp-200 bp 的片段,而正常或增殖细胞很少发生DNA断裂。脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT 酶)把FITC标记的dUTP标记到断裂DNA片段的3’-OH 末端,从而使DNA片段标记上绿色荧光。然后进行荧光显微镜或流式细胞仪检测,这个方法被称为TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法细胞凋亡检测。
本产品能够在DNA碎片末端标记上千bp的核苷酸,因而具有极高的灵敏性。可检测的样本类型有:石蜡包埋组织切片,冰冻切片,贴壁细胞和悬浮细胞。检测方法可以使用荧光显微镜或者流式细胞仪。
被引文献
乔文姝. 桦mu酮酸-紫杉醇纳米药物体系构建及其抗乳腺癌活性[D].哈尔滨工业大学,2020.
肖博. 橙皮苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响及其机制[D].华北理工大学,2020.
产品编号:
FY600017-20T
FY600017-50T
存储条件:
-20 ℃避光保存,有效期12个月或更久;
若频繁使用可在4℃避光保存3个月;
避免反复冻融。
产品组分
编号 | 名称 | 20T | 50T |
A | rTdT酶 | 20 μl | 50 μl |
B | 标记混合物 | 1000 μl | 2500 μl |
细胞在发生凋亡时,细胞内激活的DNA内切酶会切断核小体间的基因组DNA,DNA会被降解成为约180 bp-200 bp 的片段,而正常或增殖细胞很少发生DNA断裂。脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT 酶)把FITC标记的dUTP标记到断裂DNA片段的3’-OH 末端,从而使DNA片段标记上绿色荧光。然后进行荧光显微镜或流式细胞仪检测,这个方法被称为TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法细胞凋亡检测。
本产品能够在DNA碎片末端标记上千bp的核苷酸,因而具有极高的灵敏性。可检测的样本类型有:石蜡包埋组织切片,冰冻切片,贴壁细胞和悬浮细胞。检测方法可以使用荧光显微镜或者流式细胞仪。
自备耗材和设备:
1 ml 移液器
200 μl 移液器
20 μl 移液器
15 ml离心管
流式细胞仪
荧光显微镜
PBS
PI或DAPI染色液(选做)
蛋白酶K(选做)
适用实验与操作过程:
- 样本处理
- 悬浮细胞(细胞悬液)
- 收集细胞,PBS洗涤一次。
- 含1%甲醛的PBS或者4%DUOJU甲醛室温固定30分钟。摇床轻轻晃动防止细胞成团。
- PBS再洗涤1次。
- 含0.2% Triton X-100的PBS重悬细胞,室温孵育5分钟。
- 贴壁细胞(细胞爬片/涂片)
- PBS洗涤细胞1次。
- 含1%甲醛的PBS4%DUOJU甲醛室温固定30分钟。
- PBS洗涤1次。
- 用含0.2% Triton X-100的PBS室温孵育5分钟。
- 冰冻切片
- 4%DUOJU甲醛室温固定60分钟。
- PBS洗涤2次,每次5分钟。
- 含0.5% Triton X-100的PBS,室温孵育5分钟。或者用20 μg/ml的蛋白酶K室温作用15-30分钟(若用蛋白酶K通透处理,后续需用PBS洗涤2-3次,每次5分钟,将蛋白酶K漂洗干净)。
- 石蜡切片
- 脱蜡:二甲苯脱蜡2-3次,每次5-10分钟。
- 复水:用无水乙醇,90%乙醇,70%乙醇,蒸馏水依次浸泡,每次2-5分钟。
- 滴加20 μg/ml 蛋白酶K室温处理15-30分钟。
- PBS洗涤2-3次,每次5分钟,将蛋白酶K漂洗干净。
- 配制TUNEL反应体系
1个样本 | N个样本 | |
标记混合物 | 50 μl | 50×N μl |
rTdT酶 | 1 μl | 1×N μl |
总体积 | 51 μl | 51×N μl |
- 流式细胞仪检测悬浮细胞或者细胞悬液
- PBS洗涤细胞1-2次,每次5分钟。细胞沉淀中加入TUNEL反应液50 μl。37℃避光反应60分钟。
- PBS洗涤2-3次,每次5分钟。
- 选作:加PI或者DAPI染色液1 μl /ml,染细胞核。
- 补加500 μl PBS,流式细胞仪检测。
- 荧光显微镜检测细胞涂片或者细胞爬片或者组织切片
- PBS洗涤1-2次,每次5分钟。
- 加入TUNEL反应液50 μl。37℃避光反应60分钟。
- PBS洗涤3次,每次5分钟。
- 选作:加PI或者DAPI染色液1 μl /ml,染细胞核。
- 荧光显微镜下观测并拍照。注意
- 单个反应的细胞数量是多少?
- 是否需要避光?
- 细胞离心条件?
- 细胞固定条件?
- 细胞通透处理条件选择?
- 使用时需及时清洗流式细胞仪。
PI流式上机时具有一定的粘性,请及时清洗流式细胞仪,避免堵塞。连续上机数量过多也可能导致仪器堵塞导致数据误差,可在检测到一定数量的样本时进行次氯酸清洗,然后进行剩余样本的检测。
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