TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)

价格: ¥1092

品牌:弗元生物 Fuyuanbio 品牌认证

货号:FY600017

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产品详情

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库存 :10000

英文名 :TUNEL KIT

CAS号 :无CAS号

保质期 :1年

供应商 :弗元生物

保存条件 :-20℃

规格 :20T

货号 产品名称 规格 目录价(元) 促销价(元)
FY600017-20T TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC) 20 TEST 1560 1092
FY600017-50T TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC) 50 TEST 2730 1911

产品简介:

        细胞在发生凋亡时,细胞内激活的DNA内切酶会切断核小体间的基因组DNA,DNA会被降解成为约180 bp-200 bp 的片段,而正常或增殖细胞很少发生DNA断裂。脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT 酶)把FITC标记的dUTP标记到断裂DNA片段的3’-OH 末端,从而使DNA片段标记上绿色荧光。然后进行荧光显微镜或流式细胞仪检测,这个方法被称为TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法细胞凋亡检测。

        本产品能够在DNA碎片末端标记上千bp的核苷酸,因而具有极高的灵敏性。可检测的样本类型有:石蜡包埋组织切片,冰冻切片,贴壁细胞和悬浮细胞。检测方法可以使用荧光显微镜或者流式细胞仪。


被引文献
乔文姝. 桦mu酮酸-紫杉醇纳米药物体系构建及其抗乳腺癌活性[D].哈尔滨工业大学,2020.

肖博. 橙皮苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响及其机制[D].华北理工大学,2020.



产品编号:
FY600017-20T
FY600017-50T
存储条件:
-20 ℃避光保存,有效期12个月或更久;
若频繁使用可在4℃避光保存3个月;
避免反复冻融。
产品组分
编号 名称 20T 50T
A rTdT 20 μl 50 μl
B 标记混合物 1000 μl 2500 μl
产品简介:
细胞在发生凋亡时,细胞内激活的DNA内切酶会切断核小体间的基因组DNADNA会被降解成为约180 bp-200 bp 的片段,而正常或增殖细胞很少发生DNA断裂。脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT 酶)把FITC标记的dUTP标记到断裂DNA片段的3’-OH 末端,从而使DNA片段标记上绿色荧光。然后进行荧光显微镜或流式细胞仪检测,这个方法被称为TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法细胞凋亡检测。
本产品能够在DNA碎片末端标记上千bp的核苷酸,因而具有极高的灵敏性。可检测的样本类型有:石蜡包埋组织切片,冰冻切片,贴壁细胞和悬浮细胞。检测方法可以使用荧光显微镜或者流式细胞仪。
自备耗材和设备:
1 ml 移液器
200 μl 移液器
20 μl 移液器
15 ml离心管
流式细胞仪
荧光显微镜
PBS
PIDAPI染色液(选做)
蛋白酶K(选做)
适用实验与操作过程:
  1. 样本处理
    1. 悬浮细胞(细胞悬液)
  1. 收集细胞,PBS洗涤一次。
  2. 1%甲醛的PBS或者4%DUOJU甲醛室温固定30分钟。摇床轻轻晃动防止细胞成团。
  3. PBS再洗涤1次。
  4. 0.2% Triton X-100PBS重悬细胞,室温孵育5分钟。
    1. 贴壁细胞(细胞爬片/涂片)
  1. PBS洗涤细胞1次。
  2. 1%甲醛的PBS4%DUOJU甲醛室温固定30分钟。
  3. PBS洗涤1次。
  4. 用含0.2% Triton X-100PBS室温孵育5分钟。
    1. 冰冻切片
  1. 4%DUOJU甲醛室温固定60分钟。
  2. PBS洗涤2次,每次5分钟。
  3. 0.5% Triton X-100PBS,室温孵育5分钟。或者用20 μg/ml的蛋白酶K室温作用15-30分钟(若用蛋白酶K通透处理,后续需用PBS洗涤2-3次,每次5分钟,将蛋白酶K漂洗干净)。
    1. 石蜡切片
  1. 脱蜡:二甲苯脱蜡2-3次,每次5-10分钟。
  2. 复水:用无水乙醇,90%乙醇,70%乙醇,蒸馏水依次浸泡,每次2-5分钟。
  3. 滴加20 μg/ml 蛋白酶K室温处理15-30分钟。
  4. PBS洗涤2-3次,每次5分钟,将蛋白酶K漂洗干净。
  1. 配制TUNEL反应体系
  1个样本 N个样本
标记混合物 50 μl 50×N μl
rTdT 1 μl 1×N μl
总体积 51 μl 51×N μl
 
  1. 流式细胞仪检测悬浮细胞或者细胞悬液
  1. PBS洗涤细胞1-2次,每次5分钟。细胞沉淀中加入TUNEL反应液50 μl37℃避光反应60分钟。
  2. PBS洗涤2-3次,每次5分钟。
  3. 选作:加PI或者DAPI染色液1 μl /ml,染细胞核。
  4. 补加500 μl PBS,流式细胞仪检测。
  1. 荧光显微镜检测细胞涂片或者细胞爬片或者组织切片
  1. PBS洗涤1-2次,每次5分钟。
  2. 加入TUNEL反应液50 μl37℃避光反应60分钟。
  3. PBS洗涤3次,每次5分钟。
  4. 选作:加PI或者DAPI染色液1 μl /ml,染细胞核。
  5. 荧光显微镜下观测并拍照。注意
注意事项与常见问题:
  1. 单个反应的细胞数量是多少?
流式细胞仪检测推荐细胞总数为3-5 × 106。对于细胞爬片或者涂片,推荐60-90%汇合度。对于常规组织的冰冻切片或者石蜡切片,推荐切片厚度为2-5 μm,避免切片太厚。
  1. 是否需要避光?
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
  1. 细胞离心条件?
对于悬浮细胞或者细胞悬液,洗涤时候离心条件推荐为300 g5分钟。
  1. 细胞固定条件?
细胞样品固定可以用1%甲醛的PBS溶液或者4%的中性DUOJU甲醛。组织切片样品推荐用4%的DUOJU甲醛。
  1. 细胞通透处理条件选择?
细胞样品通透推荐用0.2%Triton X-100或者70%的预冷乙醇-20℃通透1-4小时。细胞样品可以在70%的乙醇溶液中-20℃保存1周。冰冻切片样品通透可以选择0.5% Triton X-100或者20 μg/ml的蛋白酶K。石蜡切片样本推荐用20 μg/ml的蛋白酶K进行通透处理。蛋白酶K做通透处理的时候,需要摸索通透时间,时间太短造成通透不彻底,时间太长容易脱片。
  1. 使用时需及时清洗流式细胞仪。

PI流式上机时具有一定的粘性,请及时清洗流式细胞仪,避免堵塞。连续上机数量过多也可能导致仪器堵塞导致数据误差,可在检测到一定数量的样本时进行次氯酸清洗,然后进行剩余样本的检测。

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