产品详情
文献和实验
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保存条件 : -20℃
保质期 :12个月
库存 :大量
供应商 :钦诚生物
规格 :50T
产品及特点- 即开即用,用户只需要提供样品模板,操作简单,定量准确快速。
- 荧光定量 PCR 检测,反应特异性强。
- 提供阳性对照,便于分析实验结果。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
规格及成分
成分 | 编号 | 50 次塑料袋包装 |
2×qPCR Mix | 90408 | 1.0 mL |
stn 专一性引物对 | yw13891390 | 200 μL |
stn 阳性对照, XXX 10E9 拷贝/μL |
yw13911392 |
100 μL |
超纯水 | 100935 | 1 mL |
使用手册 | 1 份 |
低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓
度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本 试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供 活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
- 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
- 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(最好用带芯枪头,下同)。
- 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到
- 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
- 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
- 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
- NC 管中不加任何阳性对照。
- 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值, 并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
- PCR 检测(20 μL 体系)
- 在 PCR 管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次)
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照,其他荧光 PCR 仪器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX。
- 建议 PCR 反应参数(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化)
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 93℃ | 5 min |
PCR 反应 (40 个循环) |
93℃ | 35 s |
55℃ | 45 s |
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合
DNA 时,最大吸收光谱在 471 nm,结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm, 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再
以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
上海钦诚生物科技有限公司
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