兔源性成分PCR检测试剂盒

保存条件 ： -20℃

保质期 ：12个月

库存 ：大量

供应商 ：钦诚生物

规格 ：50T

产品及特点
 

1. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
2. 荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。
3. 提供阳性对照，便于分析实验结果。

   4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
规格及成分

成分	编号	50 次塑料袋包装
2×qPCR Mix	90408	1.0 mL
stn 专一性引物对	yw13891390	200 μL
stn 阳性对照， XXX 10E9 拷贝/μL	yw13911392	100 μL
超纯水	100935	1 mL
使用手册	1 份

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓
度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本   试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供   活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到

10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。

1. 在 6 号管中加入 5  μL 10E7 拷贝/μL  的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
2. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。
3. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。
4. NC 管中不加任何阳性对照。
5. 从 1-6 号管中分别取 5  μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值， 并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

 

• PCR 检测（20 μL 体系）

1. 在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次） 

注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。

1. 建议 PCR 反应参数（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）

过程	温度	时间
预变性	93℃	5 min
PCR 反应 （40 个循环）	93℃	35 s
	55℃	45 s

3. 数据采集
按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合
DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， 最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再
以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。