产品详情
文献和实验
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库存 :大量
保质期 :一年
供应商 :钦诚生物
保存条件 :4°保存
规格 :50次
产品及特点 | 本产品是细菌 RNAout 柱式升级产品,用于快速从各种常见的中提取总 RNA。跟细菌 RNAout 相比 它具有下列特点:
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规格及成分 | 成 份 | 编 号 | 大纸盒包装 | ||
柱式细菌 RNAout 溶液 A | 80103a | 25 mL | |||
柱式细菌 RNAout 溶液 B | 80103b | 25 mL | |||
溶菌酶干粉 | 80103c | 30 mg | |||
离心吸附柱 | 60911 | 50 套 | |||
通用洗柱液 | 60408 | 50 mL | |||
RNA 洗脱液 | 71207 | 10 mL | |||
使用手册 | 80104sc | 1 份 | |||
运输及保存 | 常温运输,收到货后,溶液 A 长期保存需要放 4℃,溶菌酶干粉长期保存需要 放-20℃,有效期一年。 |
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自备试剂 | 氯仿。 | ||||
使用方法 | 注意:试验所用的实验室环境、耗材等均需要 RNase-free。操作步骤是针对在 1.5 mL 塑料离心管中进行的微量提取。
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- 吸尽液体培养基,如果是革氏阳性细菌,则加入 100uL 第 1 步制备的4mg/mL 的溶菌酶溶液,彻底重悬细菌,常温放置 5-10 分钟。如果是革氏阴性细菌,则加入 90uL TE 缓冲液和 10uL 第 1 步制备的 4mg/mL的溶菌酶溶液,彻底重悬细菌,常温放置 3-5 分钟。
- 加入 0.3mL 溶液 A,用枪充分吹打细菌沉淀,确保细菌全部裂解,没有块状物。此时裂解物总体积是 0.4mL。
- 加入约 0.2 倍体积的自备氯仿(10.4mL 裂解物需 0.1 mL 氯仿),振荡器上充分振荡混均 30 秒。
- 将上清液(约 0.3mL)转移到离心吸附柱中。注意:离心后下层有机相和中间层含有 DNA 和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和 DNA 污染。
- 加入等体积(约 0.3mL)的溶液 B,充分混匀后全部上柱。
- 12000-15000 g 室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
- 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中的 穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高,可以再用 0.3 mL 通用洗柱液重复此步一次。
- 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的使用。
- 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 收集管中,加入 30-100 uL RNA 洗脱液,室温放置两分钟。
- 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即使用或存放于
- RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子
- RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度(1 OD260 的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体
积)和产率(RNA 产量/组织用量)。 16. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则 分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。 |
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关联产品 | 非冻型细菌 RNA 保存液 |
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