乳牙牙髓间充质干细胞

细胞类型 ：干细胞

生长状态 ：优

年限 ：2年

运输方式 ：干冰

器官来源 ：乳牙

细胞形态 ：长梭型

物种来源 ：人

组织来源 ：乳牙牙髓

规格 ：1×10^6

1. 产品基本信息
产品名称:乳牙牙髓间充质干细胞
产品编号:QC-05-006
规格:(1-1.5)×10^6个细胞/管
冻存代次: P4
保存条件:液氮
警告：产品冻存液中含有DMSO，具有潜在的生物公害，操作者请谨慎处理。

2. 产品介绍
乳牙牙髓间充质干细胞来自乳牙牙髓，和成人牙髓间充质干细胞相比，其具有更高的增殖能力、自我更新能力和高度分化能力，同时乳牙牙髓间充质干细胞具有来源广泛、可塑性强、无伦理争论限制等优势，因此在临床疾病治疗方面具有广阔的应用前景，可以用于牙周病、牙髓再生、牙体修复、骨骼或神经修复、皮肤烧伤等疾病治疗领域。此外，乳牙牙髓间充质干细胞可作为细胞模型被广泛应用于体内外的细胞增殖、移植、分化和免疫调控研究。

3. 质量控制
(1) 本产品经过了病毒，细菌，真菌，支原体，内毒素检测。(2) 本产品经过细胞复苏活率，流式鉴定，细胞周期，生长曲线，倍增时间，克隆形成率，分化潜能检测。

4. 产品特性
(1) 本产品复苏细胞活率达至80%以上。(2) 操作规范的条件下，本产品具有良好的传代能力，至少传至10代。(3) 本产品具有较强的分化潜能，能分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。(4) 流式检测鉴定（CD73+，CD90+，CD105+）≥95%，（HLA-DR+、CD45+、CD34+）≦2%。(5) 该产品仅用于科研，不可应用于临床治疗或其他方面。

5. 处理原则
(1) 在无菌的条件下处理该产品。
(2) 乳牙牙髓间充质干细胞复苏培养后，建议冻存一部分细胞作为备份。
(3) 建议用于科研的细胞代次不超过10代。
(4) 建议细胞接种密度是(1.0-1.3)×104个活细胞/cm2,具体数量根据细胞生长状态加以调整。

6. 乳牙牙髓间充质干细胞的复苏
(1) 所需材料 乳牙牙髓间充质干细胞完全培养基其他选择培养基，配比如下：100ml DMEM/F12培养基 + (10~15) ml FBS +(1~2ml) 非必须氨基酸 + (1~2ml) L-谷氨酰胺 Phosphate-BufferedSaline（1×PBS）
(2) 复苏步骤 从低温容器中取出冻存管，迅速置于37°C水浴中连续晃动，1min内快速解冻； 在无菌条件下，将完全解冻的细胞悬液转移至含有10-15ml细胞培养基的离心管中； 1500 rpm 离心5 min，吸弃离心后上清； 加入适量的新鲜培养基重悬细胞，进行细胞计数及活率检测； 根据细胞数量及活率，用完全培养基调整细胞接种密度为(1.0-1.3)×104个活细胞/cm2，将细胞悬液加入培养器皿中，轻轻摇晃使细胞均匀分布； 在培养器皿上做好标记，转移至5%CO2、37℃、饱和湿度为95%的CO2培养箱中培养。 观察细胞状态，隔天换液；当细胞汇合度达到80-90%时，可进行传代处理。

7. 乳牙牙髓间充质干细胞的传代
(1) 所需材料 乳牙牙髓间充质干细胞完全培养基其他可用培养基，配比如下：100ml DMEM/F12培养基 + (10~15) ml FBS + (1~2ml) 非必须氨基酸 + (1~2ml) L-谷氨酰胺 Phosphate-Buffered Saline（1×PBS） 0.25%胰蛋白酶溶液
(2) 传代步骤 提前将完全培养基、PBS、胰蛋白酶溶液放置室温。 在无菌条件下，小心吸弃培养器皿中的培养基。 用1×PBS清洗细胞2次，注意操作轻柔，不要损害贴壁细胞。 加入0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞(根据所用培养器皿确定加入量)，室温静置消化2-3min，显微镜下观察消化情况。 当观察至80%以上细胞变圆时，加入完全培养基终止消化。 用移液管吸取溶液，反复吹打培养器皿皿底。吹打时动作轻柔，尽量避免产生气泡。 将细胞悬液转移至离心管中，1500rpm离心5min。 吸弃上清，加入适量完全培养基重悬细胞沉淀，计数。 调整细胞密度为(1.0-1.3)×104个活细胞/cm2，将细胞悬液加入培养器皿中，轻轻摇晃使细胞均匀分布。 在培养器皿上做好标记，转移至5%CO2、37℃、饱和湿度为95%的CO2培养箱中培养。 显微镜下观察细胞状态，当汇合度达到80-90%时，可进行下一次传代处理。

8. 乳牙牙髓间充质干细胞的冻存
(1) 所需材料 乳牙牙髓间充质干细胞完全培养基其他可用培养基，配比如下：100ml DMEM/F12培养基 + (10~15) ml FBS + (1~2ml) 非必须氨基酸 + (1~2ml) L-谷氨酰胺 Phosphate-BufferedSaline（1×PBS） 0.25%胰蛋白酶溶液 间充质干细胞冻存液其他可用冻存液配方：90% FBS + 10% DMSO
(2) 冻存步骤 提前将培养基、PBS、胰蛋白酶溶液放置室温。 在无菌条件下，小心吸弃培养器皿中的培养基。 用1×PBS清洗细胞2次，注意操作轻柔，不要损害贴壁细胞。 加入0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞(根据所用培养器皿确定加入量)，室温静置消化2-3min，显微镜下观察消化情况。 当观察至80%以上细胞变圆时，加入完全培养基终止消化。 用移液管吸取溶液，反复吹打培养器皿皿底。吹打时动作轻柔，尽量避免产生气泡。 将细胞悬液转移至离心管中，1500rpm离心5min，同时取样进行细胞计数。 弃离心后上清，根据细胞计数结果，使用细胞冻存液重悬细胞，调整细胞密度为105-106个/ml，轻轻吹打混匀后分装至冻存管中，旋紧冻存管盖。 冻存管做好标记，进行程序降温冻存，可选择冻存盒或程序降温仪其中一种方式冻存。
1) 冻存盒冻存方法：冻存盒直接放于-80℃，第二天将细胞转移至液氮中长期冻存；
2) 程序降温仪冻存方法：按照间充质干细胞预设程序程序降温，降温至-80℃以下后直接将细胞转移至液氮中长期冻存。