小鼠伽马干扰素Mouse IFN-γELISA KIT（48T/96T）

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小鼠伽马干扰素Mouse IFN-γELISA KIT（48T/96T）
IFN-γ简介：
被称为II型干扰素的IFN-γ，是由143个残基构成的，有20和25kDa亚型的糖蛋白，以头尾相连的同型糖蛋白的形式存在。
IFN-γ由T淋巴细胞和NK细胞产生，用以抗病毒和干扰增殖，此外，IFN-γ还有与免疫调节相关的几种功能包括调节细胞的增殖和程序性死亡，刺激或抑制不同基因的表达。
IFN-γ能通过诱导产生吲哚胺2，3-双加氧酶来抗弓形虫和衣原体的感染。IFN-γ是效应强烈的单核吞噬细胞增强剂，IFN-γ是通过增强单核吞噬细胞的的Mac-1的表达来达到增强胞饮作用和吞噬作用的。IFN-γ通过增加巨噬细胞的氧自由基和TNF-α的释放来达到增强杀肿瘤细胞的作用。IFN-γ选择性地提高包括因LPS刺激的B细胞的IgG2a和因2型T细胞呈递抗原而引起的B细胞的IgG3的释放量。有报道称IFN-γ能引起细胞的自分泌IFN-γ作用的增强。

检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IFN-γ的浓度。小鼠IFN-γ捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的小鼠IFN-γ会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IFN-γ抗体后，抗小鼠IFN-γ抗体与小鼠IFN-γ接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在IFN-γ将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，小鼠IFN-γ浓度与OD₄₅₀值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中小鼠IFN-γ浓度。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线

浓度pg/ml	典型OD值1	典型OD值2	OD平均值
0	0.0823	0.1107	0.0965
62.5	0.3185	0.3431	0.3308
125	0.5268	0.5374	0.5321
250	0.7691	0.8173	0.7932
500	1.1448	1.1632	1.154
1000	1.4558	1.5668	1.5113
2000	1.9068	2.2522	2.0795

参考文献:
 uziel and Greene, 1990  J. Invest. Dermatol., 94:275
 Parkinson et al., 1988  J.  Immunol. Methods, 15:105