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文献和实验
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小鼠白细胞介素5Mouse IL-5 ELISA KIT（48T/96T）
IL-5简介：
白介素5（IL-5）属于α螺旋细胞因子家族，该家族包括IL-3，IL-5，GM-CSF等，与该家族其它因子不同的是，IL-5必须是二倍体才有生物活性作用。IL-5由T细胞产生，小鼠的IL-5蛋白有133个氨基酸构成。
IL-5能够强烈刺激分化，细胞活化和嗜酸性粒细胞的分化，同时IL-5还能刺激胸腺细胞产生细胞毒T细胞。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-5的浓度。IL-5捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-5会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IL-5抗体后，抗小鼠IL-5抗体与IL-5接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在IL-5将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂
氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IL-5浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-5浓度。
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温（25-28℃）孵育120分钟。对于血清或血浆标本，请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本，如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温（25-28℃）孵育60分钟。
6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温（25-28℃）孵育20分钟。
8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25-28℃）孵育20分钟。
10.加入中止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线
灵敏度，特异性和重复性:
1.灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为4.8pg/ml。
2.特异性：与小鼠GM-CSF,IFN-γ,IL-1α,IL-1β, IL-1ra, IL-2, IL-3,IL-4及人的IL-5都没有交叉反应。
3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.
参考文献:
1. Takatsu, K. (1998) Cytokine and Growth Factor Reviews 9:25.
2. Sanderson, C.J. (1992) Blood 79:3101.
3. Lee, N.A. and J.J. Lee (1997) Amer. J. Respir. Cell Mol. Biol. 16:497.
4. Takaki S. et al. (1990) EMBO J. 9:4367.
IL-5简介：
白介素5（IL-5）属于α螺旋细胞因子家族，该家族包括IL-3，IL-5，GM-CSF等，与该家族其它因子不同的是，IL-5必须是二倍体才有生物活性作用。IL-5由T细胞产生，小鼠的IL-5蛋白有133个氨基酸构成。
IL-5能够强烈刺激分化，细胞活化和嗜酸性粒细胞的分化，同时IL-5还能刺激胸腺细胞产生细胞毒T细胞。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-5的浓度。IL-5捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-5会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IL-5抗体后，抗小鼠IL-5抗体与IL-5接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在IL-5将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂
氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IL-5浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-5浓度。
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温（25-28℃）孵育120分钟。对于血清或血浆标本，请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本，如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温（25-28℃）孵育60分钟。
6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温（25-28℃）孵育20分钟。
8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25-28℃）孵育20分钟。
10.加入中止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线
| 浓度pg/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
| 0 | 0.0712 | 0.0868 | 0.079 |
| 31.25 | 0.1799 | 0.2069 | 0.1934 |
| 62.5 | 0.3753 | 0.3989 | 0.3871 |
| 125 | 0.5498 | 0.573 | 0.5614 |
| 250 | 0.9057 | 0.9613 | 0.9335 |
| 500 | 1.4381 | 1.4703 | 1.4542 |
| 1000 | 2.0046 | 2.2534 | 2.129 |
灵敏度，特异性和重复性:
1.灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为4.8pg/ml。
2.特异性：与小鼠GM-CSF,IFN-γ,IL-1α,IL-1β, IL-1ra, IL-2, IL-3,IL-4及人的IL-5都没有交叉反应。
3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.
参考文献:
1. Takatsu, K. (1998) Cytokine and Growth Factor Reviews 9:25.
2. Sanderson, C.J. (1992) Blood 79:3101.
3. Lee, N.A. and J.J. Lee (1997) Amer. J. Respir. Cell Mol. Biol. 16:497.
4. Takaki S. et al. (1990) EMBO J. 9:4367.
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