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www.chuanqiubio.com
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细胞名称 | HUMSC 人脐带间充质干细胞 |
货号 | CQ80234 |
种属 | 人 |
细胞来源 | ATCC/中科院/协和医院等地引进 |
生长特性 | 贴壁生长(形态纺锤状,成纤维细胞样) |
培养条件 | 培养基:DMEM/F12 90%+FBS 10%+b-FGF 10ng/mL (建议使用本公司间充质干细胞无血清培养基) 温度:37℃ 气相:95%空气,5%二氧化碳 培养瓶/皿:使用无血清培养基时应使用针对间充质干细胞特别TC处理的培养瓶/皿,或使用纤连蛋白或其他促贴壁试剂包被过的培养瓶/皿 |
传代 | 1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6 mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代,一般2到3天换一次液; 2.待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,第一次传代比例为1:3,之后推荐传代比例为1:5到1:10; 3传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液与DPBS置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml DPBS,轻晃洗涤后弃去。使用DPBS将胰酶稀释4倍,往瓶中加2 ml稀释后的胰酶,置于室温孵育消化(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间,记录最佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入2ml含血清的完全培养基或其他胰酶中和液终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液并吹打成单个细胞悬液,1200rpm离心5min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。 |
保存 | 冻存条件:80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO (备注:建议使用本公司的冷冻液(H-W-100),用4度保存的冷冻液直接重悬细胞,不能预热后使用。) 保存条件:液氮存储 |
供应限制 | 仅供研究之用 |
常见问题及解决方案 | 1.培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。 2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时) 3.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。 |
上海传秋生物科技有限公司
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