人胚胎干细胞|人胚胎干细胞|干细胞价格_品牌:ATCC/中科院/协和医院等地引进-丁香通官网

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部分细胞特惠价，再送完全培养基1瓶。
活动截止时间：2月28日

了解更多产品信息，可登陆公司官网，具体特价细胞产品如下：
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细胞名称	人胚胎干细胞
货号	CQ80230
种属	人
细胞来源	ATCC/中科院/协和医院等地引进
生长特性	圆形克隆，贴壁
培养条件	培养基：人胚胎干细胞完全培养液温度：37℃ 气相：95%空气，5%二氧化碳
传代	小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）的复苏人胚胎干细胞的复苏（以T25为例）水浴锅37°C预热，将人胚胎干细胞完全培养液温浴到37°C。从液氮中取出冻存的人胚胎干细胞，放入水浴锅中，快速晃动使管中的细胞尽快融化，仔细观察，待剩最后一块冰晶时，快速取出。用75%酒精擦拭消毒冻存管口的外表面，在超净台中打开冻存管，将细胞冻存悬液转移至含有4ml完全培养基的离心管中，注意减少气泡的产生。为了减少细胞损失，再往冻存管中加入1ml完全培养基，稍微吹打，收集至离心管中。将细胞悬液离心1000rpm/5min。离心期间，将MEF细胞换用人胚胎干细胞完全培养液。离心后，去除上清，加入1ml人胚胎干细胞完全培养液，，轻轻吹打混匀。使克隆变小。将人胚胎干细胞按10000-40000个活细胞/cm²的密度接种到已经换好液的MEF细胞中，轻轻摇晃培养瓶，使细胞均匀分布。放入37°C，5%CO₂的培养箱中培养。复苏后第三天，给复苏的细胞换用新鲜的人胚胎干细胞完全培养基（已37°C预热）。每天换液。人胚胎干细胞的传代当人胚胎干细胞的克隆较大，出现分化或即将分化；或者由于复苏或传代接种的密度的问题，即将出克隆间融合，就必须传代。传代前准备，提前1-3天准备MEF细胞将人胚胎干细胞完全培养基，小鼠胚胎成纤维细胞完全培养液，Ⅳ型胶原酶，PBS 预热至37°C。吸弃培养瓶的旧培养液，加入2ml PBS洗涤细胞，吸弃PBS，加1mlⅣ型胶原酶覆盖细胞表面，消化，显微镜下观察，约70-80%左右的细胞变圆后，用手轻拍培养瓶的壁，使细胞脱落下来。立即加入1ml 人胚胎干细胞完全培养液，终止消化。轻轻吹打使克隆变小。将细胞克隆悬液转移到15ml 离心管中。沉降沉降期间，将MEF细胞换用人胚胎干细胞完全培养液。沉降后，去除上清，加入1ml人胚胎干细胞完全培养液，混匀。将人胚胎干细胞按10000-40000个活细胞/cm²的密度接种到已经换好液的MEF细胞中，轻轻摇晃培养瓶，使细胞均匀分布。放入37°C，5%CO₂的培养箱中培养。传代48h后换液。注意：一定要按照合适的密度进行接种，密度太稀则细胞长得慢，密度过密则容易导致胚胎干细胞的分化。
保存	冻存条件：50%完全培养基+40%FBS+10%DMSO (备注：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。) 保存条件：液氮存储
供应限制	仅供科研使用
常见问题及解决方案	1.培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。 2.收到细胞后尽快更换新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 24小时） 3.细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。