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文献和实验
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供应商 :抚生实业
样本 :Human Glycated hemoglobin A1c ELISA Kit,Glycated hemoglobin A1c
库存 :25
标记物 :免疫学检验,血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本。
适应物种 : 人,大鼠,小鼠,鸡鸭鹅,鱼等
应用 :ELISA,酶联免疫吸附测定,双抗夹心法
检测方法 :竞争法、夹心法、间接法
检测限 :12.5ng/mL~400ng/mL
规格 :48T/96T
工作原理:本试剂盒采用的是竞争法酶联免疫吸附检测技术(ELISA)。测定样品中人糖化血红蛋白A1c水平。向预先包被了人糖化血红蛋白A1c抗原的酶标孔中,加入标准品和样本,温育后,加入生物素标记的人糖化血红蛋白A1c抗体。再与HRP标记的链霉亲和素结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入显色底物TMB,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。最后,在450 nm处测定反应孔样品吸光度(OD)值,样本中的人糖化血红蛋白A1c浓度与OD值成反比,通过绘制标准曲线计算出样本中人糖化血红蛋白A1c的浓度。
产品名称 | 人糖化血红蛋白A1cELISA试剂盒 | 储存条件 | 2-8℃,避光防潮保存 |
货号 | A127482 | 检测范围 | 12.5ng/mL~400ng/mL |
最低检测限 | 1 | 特色服务 | 免费代测 |
样本处理及要求:
1. 组织标本:对于样本要求保持鲜重,称取样本中的重量不小于50mg,一般以1g为基准,但不严格要求固定样本每个重量必须达到相同的水平。匀浆的比例选取10%,相当于1g组织加9ml的匀浆液来进行匀浆。匀浆液选取PBS(PH=7.2-7.4,浓度为0.01mol/L)。匀浆过程选用组织匀浆器,冰浴上匀浆。(或者进行液氮碾磨),离心取上清,离心转速选用5000转每分,时间是15分钟。取上清液待检。
2. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
3. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
ELISA试剂盒的组成:
操作步骤:
1. 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
4. 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
5. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
7. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
8. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
9. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值),测定应在加终止液后15分钟以内进行。
公司销售的所有产品均不得用于人类或动物之临床诊断或治疗,仅可用于工业或科研等非医疗目的。
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