磷酸化蛋白纯化试剂盒50 次费用

磷酸化蛋白纯化试剂盒50 次费用

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品牌:上海邦景

货号: BJ-RD854

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英文名 :磷酸化蛋白纯化试剂盒

CAS号 :详见说明书

保质期 :详见说明书

供应商 :上海邦景

保存条件 :低温冷藏

规格 :50 次

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磷酸化蛋白纯化试剂盒50 次费用详细介绍:

公司的RNA/DNA提取目录有下面10个系列,5000余种产品
1RNA纯化系列产品
2DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
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磷酸化蛋白纯化试剂盒50 次费用GramStaining
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操作步骤:
1. 磷酸化蛋白纯化试剂盒50 次费用匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(3.5cm直径的培养板)1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNADNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-810000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-810000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml,室温放置10分钟。
8. 2-810000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

实验要点:
1CTAB 溶液在低于15时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。  
2.在最适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。 
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)mRNA。如果用和氯仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的(氯仿—=25:24:1),的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS DH5α菌种接种在LB 固体培养基(50μg/ml Amp), 37培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(50μg/ml Amp),37振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要

 

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