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提供商 ：云舟生物科技（广州）股份有限公司
服务名称 ：提供定制载体
此价格为VectorBuilder该类型产品标准服务价格，如需个性化定制，请询价。概述
MMLV逆转录病毒非编码RNA表达载体是一种在哺乳动物细胞中永久引入目标非编码RNA的高效载体。非编码RNA包括多种短（<30个核苷酸）和长（>200个核苷酸）功能RNA分子，例如微RNA（miRNA），小干扰RNA（siRNA），piwi相互作用RNA（piRNA），小核RNA（snRNA），小核仁RNA（snoRNA），大型基因间非编码RNA（lincRNA），内含子长非编码RNA（内含子lncRNA），天然反义转录物（NAT），增强子RNA（eRNA）和启动子相关RNA（PAR）， 它们都没有被翻译成蛋白质，但是已经发现在许多细胞过程中发挥重要作用，例如DNA复制，表观遗传调控，转录和转录后调节以及翻译调节。
MMLV逆转录病毒非编码RNA表达载体利用MMLV逆转录病毒基因组5' LTR中无处不在的启动子功能来驱动用户选择的非编码RNA基因的表达，该基因由RNA聚合酶II依赖性转录介导。对于RNA聚合酶II介导的转录，起始位点通常位于启动子的3'区域，而终止位点位于polyA信号序列内。因此，从该载体生成的转录本并不精确对应于选定的非编码RNA基因，而是包含上游和下游的一些附加序列。
MMLV逆转录病毒载体首先在大肠杆菌中构建为质粒。在载体构建过程中，在两个长末端重复序列（LTR）之间克隆感兴趣的非编码RNA。然后将其与几个辅助质粒一起转染到包装细胞中。在包装细胞内，位于LTR之间的载体DNA被转录成RNA，辅助质粒表达的病毒蛋白进一步将RNA包装成病毒。然后将活病毒释放到上清液中，上清液可用于直接感染靶细胞或在浓缩后感染。
当病毒被添加到靶细胞中时，RNA货物被穿梭到细胞中，在那里它被逆转录成DNA，并随机整合到宿主基因组中。在载体构建过程中放置在两个LTR之间的非编码RNA序列与病毒基因组的其余部分一起永久插入宿主DNA。
根据设计，MMLV逆转录病毒载体缺乏病毒包装和转导所需的基因（这些基因由辅助质粒携带或整合到包装细胞中）。因此，由载体产生的病毒具有复制能力不强的重要安全特征（这意味着它们可以转导靶细胞但不能在其中复制）。
广义向性： 我们的包装系统将VSV-G包膜蛋白添加到病毒表面。这种蛋白质具有广泛的嗜性。因此，来自所有常用哺乳动物物种（如人类，小鼠和大鼠）的细胞都可以被转导。此外，几乎任何哺乳动物细胞类型都可以转导，尽管我们的载体难以转导非分裂细胞（参见下面的缺点）。
大载货空间： 野生型MMLV逆转录病毒基因组为~8 kb。在我们的载体中，病毒包装和转导所需的组分占据~2.5 kb，剩下~5.5 kb来容纳用户感兴趣的DNA。由于我们的载体专为插入非编码RNA序列而设计，因此该载物空间足以满足大多数应用的需求。
高级表达式： 5' LTR 包含一个强大的无处不在的启动子，可驱动用户感兴趣的非编码 RNA 的高水平表达。
基因递送的相对均匀性：通常，病毒转导可以以相对均匀的方式将载体递送到细胞中。相比之下，质粒载体的传统转染可能高度不均匀，一些细胞接收大量拷贝，而其他细胞接收很少拷贝或没有拷贝。
体外和体内有效性：虽然我们的载体主要用于培养细胞的体外转导，但它也可用于转导活体动物的细胞。
安全：通过将病毒包装和转导所需的基因分成几个辅助质粒或将它们整合到包装细胞中，确保了我们载体的安全性。因此，从我们的载体产生的活病毒是无法复制的。
中等病毒滴度： 我们载体的病毒滴度达到~108TU/ml在包装细胞的上清液中，无需进一步浓缩。这比我们的慢病毒载体低一个数量级。
转导非分裂细胞困难：我们的载体难以转导非分裂细胞。
技术复杂性：使用MMLV逆转录病毒载体需要在包装细胞中产生活病毒，然后测量病毒滴度。与传统质粒转染相比，这些程序在技术上要求很高且耗时。
5' MoMuLV LTR: MMLV retrovirus 5' long terminal repeat. In wildtype MMLV retrovirus, 5' LTR and 3' LTR are essentially identical in sequence. They reside on two ends of the viral genome and point in the same direction. Upon viral integration, the 3' LTR sequence is copied onto the 5' LTR. The LTRs carry both promoter and polyadenylation function, such that the 5' LTR acts as a promoter to drive the transcription of the viral genome, while the 3' LTR acts as a polyadenylation signal to terminate the upstream transcript.
ψ plus pack2: MMLV retrovirus packaging signal required for the packaging of viral RNA into virus.
Non-coding RNA: The non-coding RNA of your interest is placed here. Its expression is driven by the ubiquitous promoter function in the 5' LTR.
3' MoMuLV LTR: MMLV retrovirus 3' long terminal repeat. The polyadenylation signal contained in 3' LTR serves to terminate the transcript from the upstream non-coding RNA.
pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.
Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by ampicillin selection in E. coli.
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