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提供商 ：云舟生物科技（广州）股份有限公司
服务名称 ：提供定制载体
此价格为VectorBuilder该类型产品标准服务价格，如需个性化定制，请询价。首先在大肠杆菌中将scAAV载体构建为质粒。然后将其与辅助质粒一起转染到包装细胞中，其中两个倒置末端重复序列（ITR）之间的载体区域被包装成活病毒。放置在两个ITR之间的任何基因都与病毒基因组的其余部分一起被引入靶细胞中。
野生型AAV基因组是一种线性单链DNA（ssDNA），两端有两个ITR形成发夹结构。因此，它也被称为ssAAV。为了在宿主细胞中表达ssAAV载体上的基因，ssDNA基因组需要首先通过两条途径转化为双链DNA（dsDNA）：1）以现有的ssDNA基因组为模板，以3' ITR为启动位点，通过宿主细胞的DNA聚合酶机制合成第二链DNA;2）正负链ssAAV基因组之间分子间dsDNA的形成。前者是主导途径。
我们的scAAV转移载体由ssAAV设计而成，有两个重要的区别。首先，位于 3' ITR 中的 trs（终端解析位点）在 scAAV 中删除。因此，scAAV在复制过程中具有形成单链DNA分子的趋势，该分子是两个完整的单链基因组的串联，一个正链和另一个减链。该分子可以形成自我互补的分子内dsDNA基因组。当scAAV病毒颗粒进入宿主细胞时，这种自互补的分子内dsDNA基因组可以跳过第二链合成，这是与传统ssAAV转导相关的主要限速步骤，以快速表达scAAV载体上携带的基因。因此，相对于ssAAV而言，scAAV具有更快和更高的转基因表达。其次，由于野生型AAV可以携带高达约4.7 kb的单链DNA基因组，但包装成病毒颗粒的每个scAAV DNA分子都是两个相反链的单链基因组的连接体，因此scAAV的载货量在可以适当包装成成熟病毒的5'ITR至3'ITR转基因的长度方面仅是ssAAV的一半左右。
AAV的一个主要实际优势是，在大多数情况下，AAV可以在生物安全1级（BSL1）设施中处理。这是由于AAV本质上缺乏复制，产生很少或没有炎症，并且没有引起已知的人类疾病。
在自然界中已经鉴定出许多AAV菌株。它们根据病毒表面衣壳蛋白的不同抗原性分为不同的血清型。不同的血清型可以使病毒具有不同的组织嗜性（即感染的组织特异性）。当我们的AAV载体被包装成病毒时，通过使用不同的衣壳蛋白进行包装，可以将不同的血清型赋予病毒。我们目前为ssAAV和scAAV载体系统提供的血清型包括 - 血清型1，2，3，4，5，6，6.2，7，8，9，rh10，DJ，DJ / 8，P-HP.eB，P-HP。S，AAV2-复古和AAV2-QuadYF。下表列出了不同的AAV血清型及其组织嗜性。
| 血清型 | 组织嗜性 |
|---|---|
| AAV1 | 平滑肌、中枢神经系统、肺、视网膜、胰腺、心脏、肝脏 |
| AAV2 | 平滑肌、中枢神经系统、肝脏、肾脏、视网膜 |
| AAV3 | 平滑肌、肝脏、肺 |
| AAV4 | 中枢神经系统、视网膜、肺、肾 |
| AAV5 | 平滑肌、中枢神经系统、肺、视网膜 |
| AAV6 | 平滑肌、心脏、肺、脂肪、肝脏 |
| AAV6.2 | 肺、肝 |
| AAV7 | 平滑肌、视网膜、中枢神经系统、肝脏 |
| AAV8 | 平滑肌、中枢神经系统、视网膜、肝脏、胰腺、心脏、肾脏、脂肪 |
| AAV9 | 平滑肌、肺、肝、心脏、胰腺、中枢神经系统、视网膜、睾丸、肾脏 |
| AAVrh10 | 平滑肌、肺、肝、心脏、胰腺、中枢神经系统、视网膜、肾脏 |
| AAV-DJ | 肝、心、肾、脾 |
| AAV-DJ/8 | 肝脏、大脑 |
| AAV-P-HP.eB | 中枢神经系统 |
| AAV-P-HP。S | PNS |
| AAV2-复古 | 脊神经 |
| AAV2-四头肌 | 内皮细胞 |
亮点
优势
安全：AAV是最安全的病毒载体系统。AAV本质上缺乏复制，并且不知道会导致任何人类疾病。
宿主基因组破坏风险低：转导到宿主细胞后，AAV载体在细胞核中保留为游离体DNA。缺乏与宿主基因组的整合可能是体内人类应用的理想特征，因为它降低了可能导致癌症的宿主基因组破坏的风险。
高病毒滴度： 我们的scAAV载体可以包装成高滴度病毒。当通过我们的病毒包装服务获得scAAV病毒时，滴度可以达到>1013每毫升基因组拷贝数（GC/毫升）。
广义向性：当将我们的scAAV载体包装成适当的血清型时，可以使用我们的scAAV载体轻松转导来自常用哺乳动物物种（如人，小鼠和大鼠）的各种细胞和组织类型。但某些细胞类型可能难以转导，具体取决于所使用的血清型（参见下面的缺点）。
体外和体内有效性： 我们的载体通常用于转导活体动物的细胞，但它也可以在体外有效使用。
难以转导某些细胞类型： 我们的scAAV载体系统可以转导许多不同的细胞类型，包括包装成适当血清型的非分裂细胞。然而，不同的AAV血清型对不同的细胞类型具有嗜性，并且某些细胞类型可能难以被任何血清型转导。
技术复杂性：使用病毒载体需要在包装细胞中产生活病毒，然后测量病毒滴度。与传统质粒转染相比，这些程序在技术上要求很高且耗时。这些需求可以通过在订购载体时选择我们的病毒包装服务来缓解。
5' ITR: 5' inverted terminal repeat. In wild type virus, 5' ITR and 3' ITR are essentially identical in sequence. They reside on two ends of the viral genome pointing in opposite directions, where they serve as the origin of viral genome replication.
Promoter: The promoter that drives your gene of interest is placed here.
Kozak: Kozak consensus sequence. It is placed in front of the start codon of the ORF of interest because it is believed to facilitate translation initiation in eukaryotes.
ORF: The open reading frame of your gene of interest is placed here.
SV40 late pA: Simian virus 40 late polyadenylation signal. It facilitates transcriptional termination of the upstream ORF.
3' ITR-Δtrs: AAV 3' ITR with a deleted terminal resolution site. The presence of the mutated 3’ITR leads to the generation of single-stranded, inverted repeat genomes with a mutated ITR in the middle and a wild type ITR at each end. This facilitates intramolecular base pairing within the mutant ITR extending through the genome resulting in the folding of the viral DNA to form a double-stranded molecule.
Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by ampicillin selection in E. coli.
pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.
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