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库存 ：大量
英文名 ：Hifair® IV Reverse Transcriptase
CAS号 ：点击查看
保质期 ：-20 ºC保存。有效期一年。
供应商 ：翌圣生物科技(上海)股份有限公司
保存条件 ：-20 ºC
规格 ：10000U
产品信息
产品描述
Hifair® IV Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶，与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其热稳定性大幅度提高，可耐受60℃，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合低拷贝基因的逆转录和mRNA文库构建。Hifair® IV Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。
产品组分
产品应用
全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。
活性定义
以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本酶和1 μg λDNA-Hind IV，37 ºC下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化；
核酸内切酶残留检测：200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA，37 ºC下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化；
RNase残留检测：200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA，37 ºC下孵育1 h，RNA电泳谱带不发生变化。
运输与保存方法
冰袋运输。
-20 ºC保存。有效期一年。
注意事项
1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；
2）所有操作均应在冰上进行，防止发生RNA降解；
3）为保证逆转录成功，建议使用高质量的RNA样本；
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
| Hifair® IV Reverse Transcriptase 第四代耐热逆转录酶 | 11112ES92 | 10000 U | 1525.00 |
| Hifair® IV Reverse Transcriptase 第四代耐热逆转录酶 | 11112ES93 | 5×10000 U | 5425.00 |
产品描述
Hifair® IV Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶，与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其热稳定性大幅度提高，可耐受60℃，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合低拷贝基因的逆转录和mRNA文库构建。Hifair® IV Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。
产品组分
| 编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
| 11112ES92 (10000 U) | 11112ES93 (5×10000 U) | ||
| 11112-A | 5×Hifair® IV Buffer | 250 μL | 1200 μL |
| 11112-B | Hifair® IV Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
产品应用
全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。
活性定义
以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本酶和1 μg λDNA-Hind IV，37 ºC下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化；
核酸内切酶残留检测：200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA，37 ºC下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化；
RNase残留检测：200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA，37 ºC下孵育1 h，RNA电泳谱带不发生变化。
运输与保存方法
冰袋运输。
-20 ºC保存。有效期一年。
注意事项
1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；
2）所有操作均应在冰上进行，防止发生RNA降解；
3）为保证逆转录成功，建议使用高质量的RNA样本；
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
第一链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
| 组分 | 使用量 |
| RNase free ddH2O | to 13 μL |
| Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers(2 μM) |
1 μL or 1 μL or 1 μL |
| 模板RNA | Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:1 pg-500 ng |
2. 逆转录反应液配制
| 组分 | 使用量 |
| 上一步的反应液 | 13 μL |
| 5×Hifair® IV Buffer | 4 μL |
| dNTP Mix(10 mM) | 1 μL |
| Hifair® IV Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
| RNase Inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
| 温度 | 时间 |
| 25℃ | 5 min |
| 50℃ | 15 min |
| 85℃ | 5 min |
2）逆转录温度：推荐使用50℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到55℃-60℃；
3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
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| Hifair® III Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶 | 11111ES92/93 | 10000/5×10000 U | 1426/4626 |
HB200221
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