大肠杆菌BL21感受态细胞

保存条件 ：-20℃

保质期 ：两年

英文名 ：E.coli BL21 Chemical Competent Cell

库存 ：900

供应商 ：上海烜雅生物科技有限公司

大肠杆菌BL21感受态细胞产品及特点：
本产品是采用大肠杆菌 BL21 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于 DNA 的 化学转化。本产品用作表达载体的宿主，适用于毒性蛋白的表达，适用于不是基于 T7 启动 子的表达系统。使用 pUC19 质粒检测，本产品转化效率可达 107。
菌株基因型为：BL21 strain E.coli B F- dcm ompT hsdS(rB - mB - ) gal

大肠杆菌BL21感受态细胞运输及保存：
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等

大肠杆菌BL21感受态细胞使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL， 可以根据实际情况分装使用。以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况 加入适量的 DNA，通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。
3. 42℃热击 45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀 后置于 37℃摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

大肠杆菌BL21感受态细胞注意：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产 物涂布平板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μL 转化产物涂布平 板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2 分钟）后吸除部分 培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再 倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下 的菌液再涂布新培养基进行培养。

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