克必隆G载体价格_品牌:xuanya-丁香通官网

保存条件：-20℃

保质期：两年

英文名：MagicVector G

库存：900

供应商：上海烜雅生物科技有限公司

克必隆G载体产品及特点：
本产品是在xuanya克必隆G载体的基础上开发的专门用于高效快速克隆平末端 DNA 片段的专用载体,它是由 Sma I 酶切克必隆 G 载体后经过纯化得到的即用型线性载体。跟克必隆 G 载体一样，本产品带有自杀基因，Sma I 位点位于该基因之中，只有当外源平末端 DNA 插入片段插入Sma I 位点,连接后的DNA转化的细胞才能生长,所以最后得到的转化子几乎都是含有平末端 DNA 插入片段的重组子。
1. 即用性，可以直接用于连接反应，免去繁琐的酶切，电泳检测，纯化，去磷酸化，再纯化等步骤。
2. 具有克必隆-G 载体的所有优点，包括零背景,适用于所有 E.Coli 菌株,多拷贝的 colEI 型复制起始位点。
3. 高效率，由于自杀基因的使用有效地减除了载体自身环化对平末端DNA 克隆的影响，自身环化得到的转化子在有选择液存在时只占总转化子的 1%-5%。
4. 应用广泛，可用于克隆酶切产生的平末端 DNA，Pfu 酶扩增的 PCR片段，cDNA 片段，3'和 5'RACE 片段, Taq 酶扩增的 PCR 片段(部分为平末端）。

克必隆G载体运输及保存：
低温运输, -20°C保存，有效期两年。

克必隆G载体自备试剂：
1. 外源 DNA 片段。如果含又 DNA 片段的反应液中不含其他载体 DNA（如酶切反应液，PCR 反应液)，可以不需要凝胶回收,灭活酶后即可直接将反应液用于连接反应。PCR 引物 5’端一般为 OH 基团，最好在 PCR 后用 T4 激酶磷酸化，否则连接效率极低。
2. 感受态宿主菌。DH5α，DH10B 或 HB101 等常用 E. coli 菌株。
3. 连接反应试剂。请购买现成试剂盒。
4. 选择培养基。在倒 LB 平板之前随产品赠送的选择液和 Amp (如果附赠的选择液含 Amp,则不必须额外加 Amp)按比例加入到 LB 之中,使选择液终浓度为 1X，Amp 终浓度为 50 ug/mL(如果附赠的选择液含Amp,稀释到 1X 后 Amp 的终浓度即为 50 ug/mL),混匀后倒盘。

克必隆G载体使用方法
1. 连接反应
a. 取新的经过灭菌处理的 0.5 ml Eppendorf 管, 编号。
b. 将 100 ng 载体 DNA 转移到无菌离心管中，加两倍摩尔量的外源DNA 片段，折合成重量(ng) = (外源 DNA 片段 bp 数 X 100 ng X2)/5330 bp (载体 DNA 长度)
c. 加蒸馏水至体积为 8 µl，于 45℃保温 5 分钟，使重新退火的粘端解链。将混和物冷却至 0℃。平末端 DNA 片段的克隆可以省去45℃保温 5 分钟这一步。
d. 加入 10×T4 DNA ligase buffer 1µl, T4 DNA ligase 0.5 µl，混匀后用微量离心机将液体全部甩到管底，于 16℃保温 1-24 小时。
e. 同时做只有外源 DNA 片段没有质粒载体的组对照反应。没有必要做只有质粒载体而无外源 DNA 的对照组，因为自身环化的载体不能生长, 能够生长的转化子基本上是两个载体分子相互连接
形成的新载体。但在有两倍于外源 DNA 片段存在的情况下,两个载体分子连接的机率很小。
2. E. coli 感受态细胞的转化
a. 各取每组连接反应液 2 µl 按标准方法转化 E. coli 感受态细胞。
b. 每组连接反应转化原液取 100 µl 用无菌玻棒均匀涂布于筛选培养基上，37℃下培养半小时以上,直至液体被完全吸收。

克必隆G载体相关产品：

柱式植物 RNA-DNA 双提试剂盒

柱式藻类 RNAout

大提柱式藻类 RNAout

植物 RNA 提取专用高盐溶液

真菌总RNA提取

土壤 RNAout

柱式土壤 RNAout

真菌 RNAout

白色念珠菌 RNAout

柱式真菌 RNAout

柱式白色念珠菌 RNAout

柱式真菌 RNA-DNA 双提试剂盒