一步式RT-PCRMix价格_品牌:xuanya-丁香通官网

保存条件：-20℃

保质期：两年

库存：900

供应商：上海烜雅生物科技有限公司

一步式RT-PCRMix产品及特点：

本产品是经过精心优化的、基于 MMLV 逆转录酶和 Taq DNA 聚合酶的双酶一管式 RT-PCR 试剂盒，它含有除模版 RNA 和其专一性引物以外的所有 RT-PCR 试剂，包括 MMLV 逆转录酶、Taq DNA 聚合酶、RT-PCR 缓冲液等，可以在同一反应管内完成 RNA →cDNA→PCR 反应 (RT-PCR 反应)，本产品特点如下：
1. 一管式完成 RT-PCR 反应，避免样品交叉污染。而常规的 RT-PCR 需要先进行 RT 再进行 PCR。
2. 主要成分只有两个（RT-PCR buffer 和 MMLV-Taq Mix），将加样步骤减少到最低，极大降低了加样误差，增加了可重复性。
3. 使用范围广，适用于从病毒 RNA、总 RNA 和 mRNA 样品。
4. 高灵敏度，每个 RT-PCR体系最低可以检测200 拷贝的 RNA分子（靶分子在200bp 以下时）。
5. 所得 RT-PCR 产物可以直接用于 AT 克隆、克隆等后续分析。
6. 本试剂盒足够 50 次 30uL 体系的 RT-PCR，只能用于科研目的。

一步式RT-PCRMix运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
1. RNA 模板：总 RNA，mRNA。
2. 专一性引物和探针（引物、探针应用 HPLC 或 PAGE 纯化）。
3. RNase-free & DNase-free 的 tip 头，离心管,薄壁 PCR 管等。
4. 各种规格的移液器。
5. 常规或 Real-time PCR 仪。本产品适用于下列 Realtime PCR 仪：ABI PRISM 7700、ABI PRISM 7500、ABI PRISM 7300、ABI PRISM 7000、MJ Opticon 、 BIORAD iCycler 、Roch LightCycler 等，具体使用方法请参照相应仪器的说明书。

一步式RT-PCRMix使用方法
一、样品 RNA 的制备
1. 用自选方法纯化样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数 RNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的 RNAout 相关产品。

二、引物的制备
2. 收到合成引物后，按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水（加入量见引物试管上的标签），使得两条引物的浓度均为 10μM（10 pmol/μL），然后各取 110μL 混合在一起得 220μL，标注为引物混合物，放冰上待用。220μL 足够 100 次双酶一管式 RT-PCR 反应。

一步式RT-PCRMix三、设置一管式 RT-PCR 反应（30uL 体系）
3. 在 N+1 个干净的无 RNase 的 PCR 管中（N=样品数，另外一个是阴性对照。用户可以设置其他对照，样品数需相应增加），按下表加入各成分：
成分阴性对照管样品管
RNA 模板（自备，分下面三种情况）无见下
总 RNA 无 100-500 ng
或 poly(A) mRNA 无 10-500 ng
或体外转录得到的专一 RNA 无 0.01 pg-500ng
引物混合物（第 2 步） 2 uL 2 uL
RNase-free 水补到 14 uL 补到 14 uL
双酶一管式 RT-PCR Buffer（2×） 15 uL 15uL
MMLV-Taq Mix 1 uL 1 uL
4. 轻柔混合均匀后放入 PCR 仪中进行 RT-PCR。
5. 设定 RT-PCR 反应条件时，一般将 RT 的条件设定成 42℃ 30 分钟，后接 94℃变性 5 分钟，然后进入 PCR 循环。PCR 参数需要用户根据自备引物的 Tm 值和靶分子长度决定。PCR 产物的长度最好不要超过 200bp）、最后 72℃延伸 5 分钟。
6. RT-PCR 结束后取 5-10 uL 电泳检查。

一步式RT-PCRMix注意事项
1. 使用已校准的移液器，选用一次性 PCR 反应管、离心管、tip 头等进行样本处理及配液等操作，所有用具应不含 DNA 酶和 RNA 酶。
2. 引物应尽可能避免发夹结构、二聚体等现象的发生， PCR 目标片段最好小于 200bp，尽可能在 150bp 以内。
3. 实验样品尽可能新鲜，提取过程应严防 RNA 酶污染及操作不当导致的 RNA 降解。
4. 使用本产品时建议对 RT-PCR 扩增条件、引物浓度和样品用量进行调整，选择最适当的引物浓度、样品浓度和 PCR 扩增条件。
5. 本产品使用前应在室温充分融解，并用漩涡震荡器充分混匀。
6. 统一配液后分装以减少加样误差，每次实验应设置阴性对照。
7. PCR 反应管中不能有气泡。若有气泡，可先用手指将气泡弹破，然后再低速离心消除。
8. 实验室应严格分区，避免 PCR 产物污染。

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