LAMP扩增价格_品牌:xuanya-丁香通官网

保存条件：-20℃

保质期：两年

英文名：Basic LAMP Amplification Kit

库存：900

供应商：上海烜雅生物科技有限公司

LAMP扩增产品及特点：
本试剂盒可以用于 LAMP 等温扩增，LAMP 即 Loop-Mediated Isothermal Amplification（环介导等温扩增），是 2000 年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用 4 条模板专一的特异引物和具有链置换能力的 DNA 聚合酶，在等温条件下(63℃左右) 30－60 分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于 PCR 技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。本试剂盒具有下列特点：
1. 高特异性，由于同时使用 4-6 条特异引物，所以特异性比 PCR 更高。
2. 高扩增效率，扩增效率可达到 10E9-10E10，比 PCR 灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的 DNA 分子
3. 65℃左右等温扩增，可以不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用，包含了除引物和模板 DNA 外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光 PCR 等仪器。
6. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的 LAMP 扩增。
7. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
8. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

LAMP扩增运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：LAMP 模板、LAMP 引物、自备可见光染料

LAMP扩增使用方法
1. 制备模板DNA：选用合适的方法制备模板DNA。本试剂提供30次免DNA提取试剂盒试用装，直接用裂解液作为模板进行LAMP或其他扩增。
2. 配制自备的5×LAMP引物混合液。先加超纯水或自备TE缓冲液将下列6种（或4种）引物干粉稀释到母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积异于1mL，则各成分的用量请按比例调整。混合液可以在-20℃放置2年。

3.在冰上融化除Bst DNA聚合酶之外的各种组份，混匀，稍离心。在新的反应管中加入以下组份：

LAMP扩增注意：为避免反应后开盖分析产生污染，强烈建议在此步加入LAMP可视化染料或LAMP兼容型荧光染料（公司有相关染料，如需试用，请联系），这样反应结束后可以根据反应液的颜色变化或实时荧光强度变化来判断是否有扩增，不需要开盖，避免污染。本试剂盒提供5次可视化LAMP MagicMix （2×）试用装，此试用装不含酶，可以替代上表的LAMP Mix（2×）。
4. 混匀，置于63℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，建议覆盖50uL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。如果加入了荧光染料，则需要在荧光定量 PCR仪上进行反应和实时检测。
5. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。
6. 产物置于-20℃待用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:
1) 如果使用LAMP可视化染料或LAMP兼容荧光染料，请参考相关产品的使用手册对结果进行分析。
2) 如果没有，则进行琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5 uL，1-2%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱。由于此法会污染实验环境，强烈建议不要采用。
3) 如果使用可视化LAMP Mix试用装，则有扩增的样品呈现蓝色，无扩增的样品呈现非常浅的蓝色（几乎无色）。示例见下图：

7. 疑难解答：如果阳性对照能够扩增而阴性对照不能扩出，则实验有效。如果阳性对照没有扩增出条带，则试剂盒的问题，请跟厂家联系。如果阴性对照有扩增出条带，则说明LAMP样品或试剂有扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，最好重新设计引物扩增新的靶片段。

LAMP扩增注意事项
1. 引物设计对成功扩增十分关键。除用于 SNP 分型外，尽量以保守区设计引物。
2. 引物至少包括 F3/B3 和 FIP/BIP，加入环状引物 F loop/B loop 可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC 含量和尽量避免二级结构。
4. LAMP 扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通 PCR 扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，很难去除，最好重新设计引物扩增新的靶片段。
5. 要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和 /或 Southern 杂交。

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